Študij mehanizma toplotne in kemične denaturacije modelnih proteinov s pomočjo FTIR spektroskopijeLjubič, Martin (Avtor) Grdadolnik, Jože (Mentor) Lah, Jurij (Komentor) FTIRATRproteindenaturacijaagregacijaInfrardeča spektroskopija sodi med manj pogoste metode za preučevanje konformacijskih sprememb proteinov. Kljub temu metoda nudi nekatere prednosti, kot so meritve majhnih količin vzorcev v različnih agregatnih stanjih. Pridobimo lahko informacije o medmolekulskih interakcijah, še posebej pa je metoda občutljiva pri karakterizaciji vodikovih vezi, ki sodijo med nekatere izmed glavnih sil, ki stabilizirajo strukturo proteinov. Proces denaturacije proteinov je pogosto sklopljen še z njihovo agregacijo. V magistrskem delu smo spremljali spremembe v sekundarni strukturi treh modelnih proteinov pri njihovi temperaturni in kemični denaturaciji z natrijevim dodecilsulfatom. Konformacijske spremembe smo zaznali z uporabo diferenčne spektroskopije. Z integriranjem vrhov v diferenčnih spektrih smo določili temperaturo denaturacije proteinov ter spremembe deležev elementov sekundarnih struktur. Pokazali smo, da lahko s FTIR zaznamo spremembo v temperaturi denaturacijskega prehoda ob prisotnosti majhne količine denaturanta. Z metodo dekompozicije in prileganja modelnih spektralnih trakov smo uspešno napovedali deleže sekundarnih struktur v nativnem stanju in iz površin modelnih trakov izračunali temperaturno odvisnost deleža α-vijačnic in β-agregatov za hemoglobin. Agregacija je pri hemoglobinu in konalbuminu nastopila v celotnem koncentracijskem območju preiskanim s FTIR spektroskopijo. Prisotnost dodecilsulfata je vodila do počasne agregacije proteinov. Pri visokih koncentracijah denaturanta je bila karakterizacija spektrov nemogoča zaradi prenasičenja signalov v spektru. Inzulin pri nizkih vrednostih pH raztopin ob temperaturnih meritvah ni kazal bistvenih sprememb v strukturi poleg slabenja vodikovih vezi. Ta podatek se sklada s predhodnimi rezultati, ki pokažejo rast fibril šele po začetni lag fazi.20212021-09-06 12:39:56Magistrsko delo/naloga129643VisID: 15261COBISS_ID: 78829827sl