Povezava med sintezo holesterola in cirkadianim izražanjem genov iz signalne poti Hedgehog - WntTrček, Hana (Avtor) Rozman, Damjana (Mentor) cirkadiana uraholesterolsignalizacija HHsignalizacija WNTHolesterol je verjetno najbolje poznani steroid, saj kot prekurzor igra pomembne biokemijske vloge, hkrati pa je ključen za strukturo in delovanje membran vretenčarjev. Zaradi pomembnih funkcij holesterola je vzdrževanje njegove homeostaze bistvenega pomena. V raziskavi smo želeli dobiti vpogled v povezavo prekinjene sinteze holesterola in cirkadianega izražanja genov signalnih poti Hedgehog (HH) in Wingless (WNT). Na celičnih linijah HepG2 z izbitimi posameznimi geni za zapis encimov pozne poti sinteze holesterola (CYP51, DHCR24, HSD17B7, SC5D) smo s qPCR kvantificirali izražanje genov, ki so del omenjenih signalnih poti. Pri 10 od 15 genov smo izmerili diferenčno izraženost pri vsaj enem genotipu z izbitim genom. To nakazuje, da lahko prekinjena sinteza holesterola neposredno ali posredno vpliva na signalizaciji HH in WNT. Za potrditev hipoteze, da ima vpliv tudi na cirkadiano izražanje teh genov, smo na celičnih linijah z izbitimi geni izvedli cirkadiani poskus. Potrdili smo ciklično izražanje gena DBP, ki je izhodni gen cirkadiane ure in pogosto uporabljana pozitivna kontrola. Nivo izražanja smo ovrednotili še za komponenti signalizacije WNT, DKK4 in LEF1. Rezultati so pokazali, da LEF1 ne oscilira, smo pa pri celicah z izbitim genom CYP51 morda odkrili zmožnost lanosterola in dihidrolanosterola za zagon cirkadiane ure gena LEF1. Pri genu DKK4 smo poleg cikličnega izražanja opazili tudi povečano amplitudo in izražanje gena pri vseh linijah z izbitimi geni glede na nativno. Spremembe v cirkadiani fazi izražanja nismo uspeli potrditi pri nobenem od izmerjenih genov signalizacije WNT.20212021-09-05 07:15:40Magistrsko delo/naloga129560VisID: 195217COBISS_ID: 76012547sl