Mehanizem delovanja insekticidnih proteinskih kompleksov iz gobe bukov ostrigar (Pleurotus ostreatus) na membrane črevesnega epitela ličink koruznega hrošča (Diabrotica virgifera virgifera)Milijaš Jotić, Matej (Avtor) Sepčić, Kristina (Mentor) Kostanjšek, Rok (Komentor) bioinsekticidegerolizinkoruzni hroščostrigarporotvorni proteinprotein z domeno MACPFOstreolizin A6 (OlyA6) je protein, ki ga proizvaja goba bukov ostrigar (Pleurotus ostreatus). Veže se na membranske domene sfingomielina/holesterola in skupaj s proteinsko partnersko molekulo, pleurotolizinom B (PlyB), tvori 13-merne transmembranske pore, perforacija membrane pa vodi v smrt celice. Poleg tega se OlyA6 1000-krat močneje veže na ceramid fosfoetanolamin (CPE), ki je glavni sfingolipid žuželk, zaradi česar OlyA6 v kombinaciji s PlyB deluje selektivno insekticidno proti koruznemu hrošču. V nalogi smo analizirali histološke spremembe stolpičastega epitela srednjega črevesa ličink koruznega hrošča, hranjenih z OlyA6/PlyB, kjer smo opazili vakuolizacijo citoplazme, zatekanje apikalnih celičnih površin v lumen črevesja in delaminacijo pod epitelom ležeče bazalne lamine. Prav tako smo s krioelektronsko mikroskopijo raziskali membranske interakcije kompleksa OlyA6/PlyB z lipidnimi vezikli (sestavljenimi iz komercialnih lipidov, ki vsebujejo CPE, ali izoliranih nepolarnih lipidov iz ličink koruznega hrošča) in vezikli iz membran mikrovilnega epitela črevesja. V vseh naštetih sistemih je prišlo do nastanka transmembranskih por, podobnih tistim, značilnim za membrane, ki vsebujejo kombinacijo sfingomielina/holesterola. Ti rezultati močno nakazujejo, da je za molekularni mehanizem insekticidnega delovanja OlyA6/PlyB odgovorna specifična interakcija OlyA6 s CPE in posledičen nastanek transmembranskih por v srednjem črevesu žuželke, kar odpira povsem nove možnosti pri selektivnem zatiranju škodljivcev.20212021-09-02 07:15:04Magistrsko delo/naloga129479VisID: 194889COBISS_ID: 75097603 sl