Vpliv temperature na ločbo bioloških makromolekulBavčar, Mojca (Avtor) Pompe, Matevž (Mentor) kromatografija proteinovnelinearni van't Hoffov grafinsulincitokromlizocimBSAReverznofazna kromatografija poleg analize proteinov omogoča tudi vpogled v mehanizem interakcije proteina s hidrofobno površino in ali ta vključuje procese, kot je sprememba njegove konformacije. Za štiri proteine (insulin, citokrom c, lizocim in BSA) sem preučila vpliv temperature na retencijsko obnašanje na reverznofazni koloni C18. Analiza insulina v šestih kombinacijah organske (ACN, MeOH, EtOH) in vodne faze (0.1 % TFA, 0.1 M KCl) je pokazala, da ima izbira organske komponente mobilne faze največji vpliv na temperaturno odvisnost retencijskega časa. Primerjala sem retencijsko obnašanje insulina in citokroma c v dveh mobilnih fazah, 0.1 % TFA-ACN (70:30) in 0.1 % TFA-MeOH (44:56), pri konstantnem pretoku in tlaku. Van't Hoffovi grafi in iz njih izračunane termodinamske količine kažejo, da se v molekuli insulina v TFA-ACN pri ~ 53 °C začnejo večje konformacijske spremembe, medtem ko do teh v TFA-MeOH prihaja že pri nižjih temperaturah. Podobno so večje konformacijske spremembe citokroma c v TFA-ACN prisotne pri nižjih temperaturah, v TFA-MeOH pa do teh ne prihaja. Lizocim in BSA sem analizirala z gradientno metodo 0.1 % TFA-ACN. Trendi retencijskih časov kažejo, da tudi v teh dveh proteinih prihaja do konformacijskih sprememb.20212021-08-19 14:15:08Magistrsko delo/naloga128963VisID: 9841COBISS_ID: 75435011sl