Mehanizmi vezikulacije in stabilnost vezikularnih struktur v vzorcih humane krvne plazme in morskih mikroalgBožič, Darja (Avtor) Kralj Iglič, Veronika (Mentor) Kogej, Ksenija (Komentor) biološki vzorcibiološki nanomaterialbrstenje membrandiferencialno centrifugiranjekrvna plazmamorske mikroalgesedimentacijazunajcelični vezikliZ namenom preučevanja mehanizmov nastanka in stabilnosti submikronskih veziklov v bioloških vzorcih smo analizirali male delce v krvi in kulturah treh vrst morskih mikroalg: Tetraselmis chuii (T. chuii), Dunaliella tertiolecta (D. tertiolecta) in Phaeodactylum tricornutum (P. tricornutum). V krvi in različnih pripravkih krvne plazme, pridobljenih s postopkom centrifugiranja, ter izolatih malih delcev, pripravljenih iz različnih krvnih frakcij s postopkom diferencialnega centrifugiranja in ultracentrifugiranja, smo identificirali dva mehanizma nastanka malih delcev med procesiranjem vzorcev – ehinocitno transformacijo eritrocitov s cepitvijo veziklov s koncev brstov ter trganje trombocitov pod vplivom strižnih sil pri centrifugiranju. Razvili smo matematični model za opis dinamike prerazporeditve delcev v krvi pri centrifugiranju. Ta omogoča teoretično oceno optimalnega časa centrifugiranja za pridobitev krvne plazme s kar najvišjo koncentracijo trombocitov in malih delcev, ter njihov visok izplen iz krvi; pri čemer je protokol mogoče prilagoditi posamezniku na osnovi znane vrednosti hitrosti sedimentacije eritrocitov iz hemograma. Pri mikroalgah T. chuii, D. tertiolecta in P. tricornutum smo identificirali tri različne mehanizme nastanka malih delcev, ki jih najdemo v izolatih, pripravljenih z metodami diferencialnega centrifugiranja in filtracije s tangentnim pretokom: odcepitev bička in sproščanje gradnikov v medij pri mikroalgi T. chuii, razpad unduliranih protruzij in bičkov pri mikroalgi D. tertiolecta in tvorbo virusu podobnih membranskih nanodelcev pri mikroalgi P. tricornutum. Z metodo dinamičnega sipanja svetlobe smo preverili občutljivost izolatov malih delcev za razgradnjo s surfaktantom Triton X-100 ter njihovo stabilnost pri spreminjanju osmolarnosti in pH ter spremljali njihove spremembe pri segrevanju.20212021-08-13 07:15:10Doktorsko delo/naloga128899VisID: 192679COBISS_ID: 83836163sl