Vpliv odsotnosti stefina B in antioksidantov na oksidativni stres pri primarnih mišjih PyMT rakavih celicahGaube, Neža (Avtor) Turk, Boris (Mentor) stefin BH2O2ROScelična smrtantioksidantOksidativni stres je definiran kot porušeno razmerje med reaktivnimi kisikovimi spojinami (ROS) in antioksidanti. V nekaterih študijah so nakazali povezavo med občutljivostjo celic na oksidativni stres in stefinom B, ki je endogeni inhibitor cisteinskih katepsinov. V raziskovalni nalogi smo zato želeli potrditi vpliv stefina B na oksidativni stres sprožen s H2O2 na modelu primarnih tumorskih celic MMTV-PyMT divjega tipa in z izbitim genom za stefin B. Celice z izbitim genom za stefin B so imele po tretmaju s H2O2 signifikantno večji delež mrtvih celic kot celice divjega tipa, vendar pri tem nismo izmerili kaspazne aktivnosti. Pokazali smo, da tretma s H2O2 v celicah z izbitim genom za stefin B hitro dvigne nivo ROS in povzroči oksidacijo kardiolipina. Tretma je vplival tudi na povišanje pH v lizosomih, vendar smo z uporabo inhibitorja cisteinskih proteaz ugotovili, da katepsini najverjetneje nimajo glavne vloge pri celični smrti sproženi s H2O2. Dodatek antioksidanta N-acetyl-cisteina je izboljšal viabilnost celic in omejil nastanek ROS. Dodatek antioksidanta vitamina C pa na nastanek ROS ni vplival, viabilnost celic pa je celo poslabšal. Na podlagi teh rezultatov smo sklepali, da niso vsi antioksidanti enako učinkoviti in da je njihova učinkovitost odvisna od številnih dejavnikov (npr. uporabljene koncentracije antioksidanta in vrste nastalih ROS). Zaključimo lahko, da v našem celičnem modelu s H2O2 nismo sprožili apoptoze, ampak neko drugo obliko celične smrti. Najverjetneje pride v celicah z odsotnim stefinom B do aktivacije NLRP3 inflamasoma in od ROS-odvisne celične smrti (npr. feroptoza), kar bi lahko potrdili v nadaljevanju raziskovalne naloge.20212021-07-12 11:15:00Magistrsko delo/naloga128419VisID: 13741COBISS_ID: 73969667sl