Vpliv soli na fazno stabilnost mešanice BSA s polietilen glikolomBelak Vivod, Matic (Avtor) Lukšič, Miha (Mentor) Fazna stabilnostBSApolietilen glikol(1-1) elektrolitiHofmeistrova vrstaProteini so biološke makromolekule, zgrajene iz aminokislin. Razlikujejo se po številu in zaporedju v polipeptidno verigo povezanih aminokislin (primarna struktura). Le-to vpliva na zvitje proteina v njegovo nativno obliko (sekundarna, terciarna, kvartarna struktura). Vloga proteinov v živih organizmih je različna: strukturna, funkcijska in regulatorna. Na stabilnost danega proteina v raztopini vplivajo njegova koncentracija, vrednost pH in vrsta pufra, vrsta in koncentracija dodatkov (npr. soli, sladkorji, polimeri), temperatura, tlak itd. Študij pogojev fazne stabilnosti proteinov v raztopinah (denaturacija, agregacija, fazna separacija) je eden izmed ključnih dejavnikov pri razvoju zdravil, saj sta od nje odvisna učinkovitost in rok uporabnosti biološkega zdravila. Agregacija proteinov ima za posledico vrsto bolezenskih stanj (Alzheimerjeva, Parkinsonova, siva mrena), med tem pa je lahko fazna separacija tudi zaželen pojav, denimo pri čiščenju proteinov (kristalizacija). V okviru magistrskega dela sem proučeval vpliv polietilenglikola (PEG) in soli na fazno stabilnost govejega serumskega albumina (BSA) v acetatnem pufru pri dveh pHvrednostih (blizu in pod izoionsko točko). Uporabil sem PEG z molsko maso 6000, 10000 in 20000 g/mol ter različne natrijeve soli (NaF, NaCl, NaBr, NaI, NaNO3, NaOAc) ter alkalijske kloride (LiCl, NaCl, KCl, RbCl, CsCl). Koncentracija BSA je bila v vseh primerih 90 mg/mL. Raztopine sem pripravil v 0,1 M acetatnem pufru s pH = 4,6 in 4,0. Dodatek PEG destabilizira raztopino (pomakne temperaturo točke zmotnitve k višjim vrednostim) tem bolj čim večja je njegova molska masa ter višja kot je njegova koncentracija. Efekt dodanega PEG je v raztopinah s pH = 4,6 močnejši kot pri 4,0. Ob naraščajoči koncentraciji soli je efekt soli pri pH = 4,6 stabilizacijski, pri pH = 4,0 pa destabilizacijski. Vidni so ionospecifični efekti tako pri anionih kot pri kationih. Med Tc in standardno prosto entalpijo hidratacije anionov/kationov dodane soli obstaja korelacija. Pri pH ≈ pI velja, da ion z bolj negativno standardno prosto entalpijo hidratacije zviša Tc (destabilizira raztopino), medtem ko pri pH < pI velja, da jo tak ion zniža (stabilizira raztopino).20202021-06-03 11:02:16Magistrsko delo/naloga127346VisID: 9681COBISS_ID: 34951683 sl