Karakterizacija bakteriofaga, zapisanega na plazmidu pBtic235 bakterije Bacillus thuringiensisMiklavčič, Urša (Avtor) Butala, Matej (Mentor) Bacillus thuringiensisplazmid pBtic235bakteriofagLexAgp7preklop iz lizogenega v litični cikelBakterija Bacillus thuringiensis subsp. israelensis vsebuje poleg kromosoma še številne molekule plazmidne DNA, ki so sposobne samostojnega podvojevanja. Eden izmed plazmidov je linearen in vsebuje gene bakteriofaga GIL01, drugi, krožni plazmid pBtic235 vsebuje gene slabše okarakteriziranega bakteriofaga. V magistrski nalogi smo se osredotočili na vpliv proteinov LexA bakterije B. thuringiensis in gp7 bakteriofaga GIL01 na prehod bakteriofaga, zapisanega na plazmidu pBtic235 iz lizogenega v litični življenjski cikel. S prenosom western smo želeli preveriti aktivnost protiteles v serumih proti proteinom gp6, gp7 bakteriofaga GIL01 in proti proteinu LexA bakterije B. thuringiensis. Slednja protitelesa bi nam služila pri analizi vpliva proteinov gp6, gp7 ter LexA na uravnavanje genetskega stikala bakteriofaga, zapisanega na pBtic235. Validacija protiteles potrjuje specifično aktivnost protiteles proti proteinu LexA. Analizirali smo pomen proteina gp7 na iniciacijo litičnega cikla bakteriofaga, zapisanega na pBtic235, s spremljanjem rastnih krivulj različnih sevov po indukciji z mitomicinom C. Potrdili smo, da poškodba DNA sproži litični cikel bakteriofaga, zapisanega na plazmidu pBtic235. Poleg tega naši rezultati nakazujejo, da protein gp7 bakteriofaga GIL01 vpliva na časovno uravnano sprožitev litičnega cikla bakteriofaga, kodiranega na pBtic235. Testirali smo tudi indukcijo bakteriofaga s plazmida pBtic235 v sevu bakterije z okvarjenim LexA proteinom, ki se ne more samoinaktivirati. Rezultati nakazujejo, da je protein LexA pomemben tudi za uravnavanje litičnega/lizogenega cikla bakteriofaga, zapisanega na pBtic235.20212021-03-25 07:15:03Magistrsko delo/naloga125560VisID: 191066COBISS_ID: 59729411sl