Priprava molekulskih konstruktov himernih antigenskih receptorjev za prenos v limfocite TKrašna, Mirjam (Avtor) Jeras, Matjaž (Mentor) Rajčević, Uroš (Komentor) Himerni antigenski receptorsestavljanje po Gibsonumolekulsko kloniranjevariabilni fragment enojne verige protitelesa scFvCD20transpozonAdoptivna celična terapija z limfociti z izraženim himernim antigenskim receptorjem (CAR T) je od njene odobritve za zdravljenje akutne limfoblastne levkemije (ALL) in difuznega velikoceličnega B-limfoma (DLBCL) predmet številnih raziskav, ki so usmerjene v možnosti razširitve uporabnosti CAR T še na zdravljenje drugih rakavih bolezni. V okviru magistrske naloge smo želeli transpozonski plazmid, ki nosi zaporedje za himerni antigenski receptor, z metodami molekulskega kloniranja preurediti tako, da himerni antigenski receptor ne bi prepoznaval površinskih molekul CD19, pač pa molekule CD20. Tako bi limfociti T, v katere bi ta novi plazmid elektroporirali, s svojim citotoksičnim delovanjem še vedno prepoznavali predvsem maligne celice pri DLCBL in ALL, vendar pa bi bila njihova učinkovitost zaznave, zaradi večje gostote molekul CD20 na teh celicah, bolj učinkovita. Pri našem delu smo uporabljali moderno metodo sestavljanje po Gibsonu (ang. Gibson assembly). Ugotovili smo, da sta bila plazmida, ki smo ju izbrali zaradi visokih deležev citozina in gvanina v zaporedjih, ključnih za kloniranje in posledično tvorbo lasnic, neprimerna. Na osnovi naših izsledkov predlagamo alternativne pristope k tovrstnem kloniranju.20212021-02-21 07:45:03Magistrsko delo/naloga124827VisID: 79881sl