Vpliv ouabaina na izražanje natrij-kalijeve črpalke in znotrajcelično signaliziranje v kulturi človeških in podganjih skeletnomišičnih celicBezjak, Katja (Avtor) Pirkmajer, Sergej (Mentor) Matkovič, Urška (Komentor) ouabainnatrij-kalijeva črpalkaskeletne mišiceznotrajcelična signalizacijainterlevkin-6Uvod: Ouabain je kardiotonični glikozid, ki svoje učinke sproži preko natrij-kalijeve črpalke (NKA), ki je doslej njegov edini znan receptor. Skeletne mišice so največji organ v človeškem telesu in zato vsebujejo največjo količino NKA ter tako predstavljajo pomembno tarčno tkivo za ouabain. Ouabain s svojo vezavo na NKA ne vpliva samo na njeno transportno funkcijo, ampak tudi na znotrajcelično signalizacijo, kar bi lahko vplivalo tudi na endokrino funkcijo skeletnih mišic (npr. izločanje interlevkinov). Skeletnomišične celice izločajo interlevkin-6 (IL-6) med telesno aktivnostjo, med katero se najverjetneje iz nadledvičnih žlez izloča tudi endogeni ouabain. Namen: Ugotoviti, ali bo ouabain v skeletnomišičnih celicah vplival na izražanje NKA in ali bo aktiviral signalne poti, ki so lahko prožene preko NKA in so za odziv mišice na telesno aktivnost še posebej pomembne. Hipoteze: 1) Ouabain zniža izražanje proteina NKAα1 v človeških skeletnomišičnih celicah; 2) Ouabain aktivira signalni poti Src/ERK1/2 in Akt/mTOR v človeških skeletnomišičnih celicah; 3) Ouabain zavira signalno pot IL-6/JAK/STAT3 v človeških skeletnomišičnih celicah; 4) Ouabain ne vpliva na izražanje NKAα1 in ne proži signalnih poti v podganjih skeletnomišičnih celicah. Metode: Kot model smo uporabili človeške skeletnomišične celice in podganje skeletnomišične celice L6 ter določili izražanje proteinov z metodo prenosa western, izražanje genov pa z metodo RT-qPCR. Rezultati: V človeških skeletnomišičnih celicah je ouabain znižal izražanje proteina NKAα1, aktiviral signalni poti Src-ERK1/2 in Akt/mTOR in zavrl je signalno pot IL-6/JAK/STAT3. V podganjih skeletnomišičnih celicah ouabain ni vplival na izražanje NKAα1 in ni imel pomembnejših učinkov na aktivacijo znotrajceličnih signalnih poti. Zaključki: Ugotovili smo, da je mehanizem znižanja izražanja proteina NKAα1 v človeških skeletnomišičnih celicah posttranskripcijski. Odzivnost signalne poti Src-ERK1/2 je relativno majhna, aktivacija signalne poti Akt/mTOR pa je najverjetneje neodvisna od Src. Pri z ouabainom povzročenim zavrtjem signalne poti IL-6/JAK/STAT3 je udeleženih več mehanizmov, za razjasnitev katerih bi bili potrebni dodatni poskusi. Na podlagi rezultatov na podganjih skeletnomišičnih celicah smo ugotovili, da so signalni učinki ouabaina odvisni od prisotnosti na ouabain občutljive NKAα1.20212021-01-27 08:45:19Magistrsko delo/naloga124496VisID: 79818sl