Ločba enantiomerov in encimsko vrednotenje zaviralcev butirilholin-esterazeČernigoj, Matevž (Avtor) Gobec, Stanislav (Mentor) Brus, Boris (Komentor) butiril-holin esteraza kiralnost zaviralci butirilholin-esteraze enantiomeri ločba z boratnim pufrom encimski testButirilholin-esteraza je encim, katerega koncentracija se z napredovanjem Alzheimerjeve bolezni značilno zviša, zaradi česar predstavlja pomembno tarčo za zdravljenje poznih stadijev te bolezni. S pomočjo visoko-tlačne tekočinske kromatografije smo razvili pogoje, ki so omogočili ločbo racemnih zmesi selektivnih zaviralcev butirilholin-esteraze do njihovih čistih enantiomerov. Izbrana kolona ima omejeno število dovoljenih mobilnih faz. Med izbranimi bazičnimi mobilnimi fazami, raztopina trietilamina in fosfatni pufer nista omogočali ločbe racemnih zmesi zaviralcev. Ločba z boratnim pufrom pa je bila uspešna in zato smo metodo iz analitske kolone prenesli na semi-preparativno kolono. Izoliranim miligramskim količinam enantiomerov N-((1-(2,3-dihidro-1H-inden-2-il)piperidin-3-il)metil)-N-(2-metolsietil)-2-nafamida in N-((1-benzilpiperidin-3-il)metil)-N-(2-metoksietil)naftalen-2-sulfonamida smo izmerili čistost in specifično sučnost. Z encimskim testom smo zaznali različno stopnjo stereoselektivnosti čistih enantiomerov. Določili smo srednjo zaviralno koncentracijo tako izoliranim čistim enantiomerom kot tudi njihovim racemnim zmesem. Ugotovili smo, da ima najaktivnejši enantiomer (+)-1 s 13,4 nM vrednostjo IC50 več kot 10-krat močnejšo afiniteto do aktivnega mesta butirilholin-esteraze kot distomer (-)-1. Pri sulfonamidnemu analogu (±)-2 pa je stereoselektivnost čistih enantiomeorov izrazito manjša. Evtomeru (-)-2 smo določili 4,5 nM vrednost IC50.[M. Černigoj]20152020-09-29 10:51:18Magistrsko delo/naloga121041UDK: 543.057:616.894(043.3)COBISS_ID: 3885169sl