Izražanje mimotopov glavnega alergena arašidov Ara h 2 na površini mlečnokislinskih bakterij Lactococcus lactisStrasner, Sara (Avtor) Lunder, Mojca (Mentor) mimotopi mlečnokislinske bakterije alergija na arašide površinsko izražanje alergijske reakcijeAlergije so motnje v delovanju imunskega sistema, s katerimi se dandanes spopada vse več ljudi. Obstajajo sicer različni načini zdravljenja teh bolezni, a so pogosto zahtevni, imajo resne neželene učinke, so neprijetni za pacienta in niso nujno uspešni. Vse to so razlogi, zaradi katerih se raziskovalci usmerjajo v iskanje novih možnih terapij. Velik potencial izkazujejo kratki peptidi-mimotopi, ki lahko posnemajo dejanske alergene in se vežejo na protitelesa IgE pri bolniku, a ne povzročijo alergijske reakcije ter tako sčasoma vodijo v umiritev alergijskega odziva. Odločili smo se jih raziskati v tej magistrski nalogi. Izbrali smo mimotope, ki posnemajo glavni alergen arašidov, saj je prav alergija za arašide ena najpogostejših. Za nosilce smo uporabili mlečnokislinske bakterije – sev Lactococcus lactis, ki veljajo za koristne in so dobro raziskane. Cilj magistrske naloge je bil pripraviti transformirane mlečnokislinske bakterije s sposobnostjo površinskega izražanja mimotopov, ki posnemajo alergen arašidov in se vežejo na protitelesa IgE. Bakterije Lactococcus lactis smo transformirali s plazmidi, ki so vsebovali zapise za izbrane peptide-mimotope, s postopkom elektroporacije. Predhodno smo njihove zapise pomnožili v bakterijah Escherichia coli. Uspešnost transformacije smo preverjali s potrjevanjem pravilnega nukleotidnega zaporedja za izbrane peptide v bakterijah, uspešnost izražanja in funkcionalnost peptidov pa s pomočjo encimsko imunoadsorpcijskega testa (ELISA) ter z metodo prenosa po westernu. S celotnim eksperimentalnim delom smo dosegli postavljeni cilj – proces transformacije je bil uspešen, saj so bakterije na svoji površini izražale želene peptide. To smo dokazali s potrjenimi ustreznimi sekvencami vstavljenega genskega zapisa. S prenosom po westernu smo dokazali prisotnost peptidov na površini L. lactis. Ko smo uporabili humani serum pacientov z alergijo, pa smo s prenosom po westernu potrdili, da so peptidi res mimotopi. Mimotopi imajo velik potencial in upamo, da bodo nadaljnje raziskave prinesle nova, boljša zdravila za alergijske bolezni.[S. Strasner]20162020-09-28 12:33:49Magistrsko delo/naloga120985UDK: 616-056.43(043.3)COBISS_ID: 4148337sl