Izolacija in karakterizacija rekombinantnega proteina erilizina B, pripravljenega v kvasovki Saccharomyces cerevisiaeKatrašnik, Mojca (Avtor) Skočaj, Matej (Mentor) Petrovič, Uroš (Komentor) rekombinatni proteiniprotein erilizin BizolacijakvasovkeSaccharomyces cerevisiaepoliakrilamidna elektorforezafluorescenčna mikroskopijaProtein erilizin B je 59 kD velik protein iz užitne gobe kraljevi ostrigar (Pleurotus eryngii). Če ga rekombinantno izražamo v bakteriji Escherichia coli, se ne zvija pravilno in tvori inkluzijska telesca, posledično pa je doprinos topnega proteina zelo nizek. Erilizin B smo zato želeli izraziti v kvasovki Saccharomyces cerevisiae, saj smo pričakovali, da se bo protein izražal v topni obliki in da ga bomo izolirali v višjih koncentracijah. Izražanje rekombinantnega proteina erilizina B smo preverjali na več načinov. Spremljali smo hitrost rasti kvasovke S. cerevisiae in protein skušali zaznati s poliakrilamidno elektroforezo v prisotnosti natrijevega dodecil sulfata in s prenosom western. Ker je erilizin B v kombinaciji s proteinom ostreolizinom A6 hemolitičen, smo njegovo prisotnost preverili s hemolitičnim testom na govejih eritrocitih. V primeru, ko smo izražali erilizin B, označen z zelenim fluorescenčnim proteinom (EryB-eGFP), smo rast rekombinantnih kvasovk spremljali z merjenjem fluorescence in jih vzporedno opazovali s fluorescenčnim mikroskopom. Izražanja rekombinantnega proteina erilizina B nismo zaznali, zato sklepamo, da kvasovka S. cerevisiae v kombinaciji z ekspresijskim vektorjem pYES2 ni primeren ekspresijski sistem za pridobivanje rekombinantnega erilizina B.[M. Katrašnik]20202020-09-18 07:17:25Magistrsko delo/naloga120299UDK: 577.112:582.282.23:537.363:543.456VisID: 180862COBISS_ID: 32546051sl