Proteolitično procesiranje receptorja za urokinazni aktivator plazminogena s cisteinskimi katepsiniKolarič, Matej (Avtor) Turk, Boris (Mentor) uPARrakproteolizacisteinski katepsinitandemska masna spektrometrijaZa boljše prognoze rakavih obolenj je ključno razumevanje molekularnobioloških bolezenskih procesov. V magistrski nalogi smo proučevali proteolitično interakcijo proteina uPAR in zunajceličnih katepsinov, kar bi lahko imelo velik vpliv na napredovanje in metastaziranje raka. Da bi identificirali cepitveno mesto katepsina na proteinu uPAR, smo zanj pripravili cDNA konstrukt, kateremu smo dodali zapis za reporterski peptid. Fuzijski protein smo izrazili v človeških celičnih linijah MDA-MB-231, HEK-293 in HeLa. Transficirane celice HeLa, ki so od vseh celic izražale največjo količino fuzijskega proteina, smo obdelali s cisteinskimi katepsini K, L in S. Ugotovili smo, da vsi odcepijo ektodomeno uPAR. Od testiranih katepsinov je uPAR najbolj učinkovito cepil katepsin S. S tandemsko masno spektrometrično analizo smo določili cepitveni mesti D299 in Q301, ki sta posledica katepsina S. Cepitveni mesti se ujemata z velikostjo odcepljene ektodomene uPAR, ki smo jo zaznali z imunološko detekcijo. Po primarni strukturi ustrezata znani proteolitični specifičnosti katepsina S, njun položaj na terciarni struktur proteina uPAR pa pokaže, da se nahajata na sterično dostopni regiji.20202020-09-14 14:05:12Magistrsko delo/naloga119981VisID: 11802COBISS_ID: 31281155sl