Optimizacija postopka ekstrakcije tetraciklinov iz kulture Streptomyces rimosusStrašek, Maša (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Avbelj, Martina (Komentor) tetracikliniekstrakcijaStreptomyces rimosusoksitetraciklinsekundarni metabolizemTetraciklini (TC) so poliketidni naravni proizvodi, ki vključujejo številna klinično pomembna antibakterijska zdravila, kot je oksitetraciklin (OTC) - antibiotik širokega spektra, ki ga proizvaja pomemben industrijski mikroorganizem Streptomyces rimosus. Zaradi vedno večje potrebe po novih in cenejših terapevtikih, farmacevtska industrija stalno optimizira bioprocese in tako zmanjšuje stroške bioproizvodnje antibiotikov. To vključuje tudi izboljšanje postopkov ekstrakcije in čiščenja. Cilj dela je bilo ovrednotiti in preizkusiti različne postopke ekstrakcije tetraciklinov iz fermentacijske brozge kulture Streptomyces rimosus. Uporabili smo gensko spremenjeni sev bakterije S. rimosus, ki med biosintezo oksitetraciklina proizvaja dva tetraciklinska medprodukta – dehidro TC in dehidro OTC. Kot kontrolni sev smo uporabili S. rimosus, ki proizvaja OTC v visokih koncentracijah. Izvedli smo primerjalno analizo, tako da smo zasičili kulturo z uporabo NaH2PO4, in to primerjali z metodo, kjer smo pH spreminjali z dodatkom HCl ali NaOH in nato izvedli ekstrakcijo z etil acetatom v razmerju 1:1. V gojišče smo dodajali tudi dve vrsti amberlitov, da bi dosegli takojšnjo adsorpcijo tetraciklinov, proizvedenih med bioprocesom. Tetracikline smo nato eluirali iz amberlitov z metanolom. Zastopanost tetraciklinov smo v obeh fazah – vodni in organski, analizirali s tankoplastno kromatografijo, visokotlačno tekočinsko kromatografijo in masno spektrometrijo sklopjeno s tekočinsko kromatografjo. Za najučinkovitejšo metodo se je izkazal dodatek amberlitov XAD16N v brozgo in ekstrakcija tetraciklinov iz amberlitov z metanolom. To metodo smo tudi prenesli v večji volumen in ekstrakte koncentrirali z vakuumskim uparjanjem. Končni ekstrakti so vsebovali tarčne tetraciklinske medprodukte v koncentracijah 2 g/L dehidro TC in 0,4 g/L dehidro OTC.[M. Strašek]20202020-09-11 07:17:15Diplomsko delo/naloga119720UDK: 602.3:579.873.7:604.4:615.33(043.2)VisID: 179702COBISS_ID: 31078403sl