Optimizacija priprave senzorskih rastlin krompirja za raziskave imunske signalizacijeMahkovec Povalej, Tjaša (Avtor) Gruden, Kristina (Mentor) Lukan, Tjaša (Komentor) biološki senzorcitokininiJas9-VENUSkrompirjev virus Yrastlinski hormonirastlinski imunski sistemredoks stanjeroGFPROSSolanum tuberosumKlasične biokemijske in vitro metode za proučevanja rastlinskih biotskih interakcij so zamudne, invazivne in omogočajo vpogled le v posamezno stanje celice. Zato je ključen razvoj biosenzorjev, ki omogočajo neinvazivno spremljanje rastlinskega imunskega odziva in vivo z visoko časovno in prostorsko ločljivostjo. Namen magistrskega dela je bila optimizacija priprave senzorskih rastlin krompirja za raziskave imunske signalizacije. S tehnologijo Plant X-tender smo pripravili citokininski senzor za določanje koncentracije citokininov v celici ter njegovo delovanje testirali na rastlinah tobaka po prehodni transformaciji. S stabilno transformacijo smo pripravili transgene rastline krompirja sort Rywal in Désirée s senzorjem Jas9-VENUS in transgeno sorto krompirja NahG-Rywal s senzorjem redoks stanja pt-roGFP2. V drugem delu smo s senzorjem redoks stanja, po izbiri transformiranih linij z ustrezno fluorescenco, razvili protokol za zaznavanje in določanje redoks stanja v krompirju z uporabo konfokalne mikroskopije in programov za analizo slik. Uporabnost senzorja smo testirali z reducentom in oksidantom in s prostorsko-časovno resolucijo določili redoks stanje kloroplastov po okužbi rastlin s PVY. Ugotovili smo, da se po okužbi spremeni redoks stanje v kloroplastih celic glede na oddaljenost od lezij. Ob lezijah so kloroplasti v oksidiranem stanju, kar verjetno zmanjša medcelični transport in s tem se zmanjša možnost za širjenje virusa naprej po rastlini, stran od lezij pa so kloroplasti v reduciranem stanju, da lahko medcelična komunikacija poteka normalno.20202020-07-23 07:15:04Magistrsko delo/naloga117712VisID: 176010COBISS_ID: 26619907sl