Regulacija signalnih poti limfocitov T z uporabo metod sintezne biologije za izboljšano varnost celične imunoterapijeKrivec, Eva (Avtor) Jerala, Roman (Mentor) celična imunoterapijaCAR-TSTAT5bproteaza TEVdvojni luciferazni testCelice T z izraženim himernim receptorjem za tumorske antigene (ang. Chimeric antigen receptor T cell ali CAR-T) predstavljajo novejšo obliko terapije na področju zdravljenja raka. Izkazala se je za izredno uspešno na področju zdravljenja določenih oblik krvnega raka, vendar ima lahko tudi hude stranske učinke. Zato je ena izmed poti razvoja celičnih terapij uporaba sintezne biologije z namenom vpeljave molekularnih stikal v celice CAR-T, ki jih lahko nadzorujemo z uporabo majhnih molekul, s katerim vplivamo na signalne poti v celici in posledično uravnavamo različne celične procese, kot so aktivacija, proliferacija ali indukcija apoptoze. Cilj naloge je bil z uporabo kombinacij represorske in/ali aktivacijske domene vplivati na aktivnost transkripcijskega faktorja STAT5b, ki je vpleten v od citokinov odvisno proliferacijo celic T. Za aktivacijo ali represijo smo uporabili dva pristopa. Prvi je vključeval cepitev kovalentno vezanih domen z uporabo proteaze TEV. Drugi način je vključeval uporabo dimerizacijskih domen dmrC in dmrA za povezavo med DNA vezalno domeno transkripcijskega faktorja STAT5b in aktivacijsko ali represorsko domeno. Delovanje modificiranih transkripcijskih faktorjev smo merili v celični liniji HEK293, kjer smo spremljali raven izražanja poročevalskega gena kresničkine luciferaze. Delovanje izbranega modificiranega transkripcijskega faktorja smo nadalje preučili v celicah Jurkat, kjer smo z uporabo kvantitativne reakcije z verižno polimerazo v realnem času spremljali izražanje endogenih genov. Z uporabo DNA vezalne domene STAT5b, kovalentno povezane z aktivacijsko domeno ali represorsko domeno, smo uspešno uravnavali izražanje poročevalskega gena kresničkine luciferaze, medtem ko učinka na izbranih endogenih genih nismo zaznali.20202020-07-08 07:15:26Magistrsko delo/naloga117339VisID: 175931sl