Karakterizacija regulacije modula toksin-antitoksin higBA2 iz bakterije Vibrio cholerae in vivoČernoša, Iva (Avtor) Jerala, Roman (Mentor) Hadži, San (Komentor) biotehnologijagenski inžiniringsistemi toksin-antitoksinhigBA2negativna kooperativnostperzistencaSistemi toksin-antitoksin so sestavljeni iz genskih parov toksina, ki vpliva na metabolizem, ter antitoksina, ki regulira toksin in ga ob normalnih rastnih razmerah nevtralizira. Njihova najbolj splošno sprejeta funkcija je stabilizacija genskih elementov, druge predlagane funkcije obsegajo altruistično apoptozo, sodelovanje pri perzistenci ter obrambo pred fagi. Za modul toksin-antitoksin higBA2 iz Vibrio cholerae je značilna regulacija z negativno kooperativnostjo, ki jo povzroča N-končna intrinzično nestrukturirana domena antitoksina HigA2. Ta se izključujoče veže na toksin HigB2 (s čimer izniči endonukleazno aktivnost toksina) ali sodeluje pri vezavi antitoksina na operatorsko regijo (s čimer ojača represijo modula higBA2). Za analizo regulacije modula higBA2 smo izdelali vektorske konstrukte v Escherichia coli, v katerih je izražanje RFP vezano na operator modula higBA2, toksin HigB2 in antitoksin HigA2 pa sta pod različno močnimi konstitutivnimi promotorji in sta zaradi tega prisotna v različnih molskih razmerjih. Z merjenjem flourescence smo potrdili, da je antitoksin HigA2 močan represor operona higBA2, njegova nestrukturirana N-končna domena sodeluje pri vezavi na DNK, brez nje se antitoksin HigA2 na operatorsko regijo higBA2 veže šibkeje. Ob pribitku antitoksina HigA2 je bila represija modula higBA2 močnejša, pribitek toksina HigB2 v nasprotju z našo hipotezo ni zmanjšal represije modula higBA2, temveč jo je zvečal. Pri nizkih koncentracijah antitoksina smo opazili povečano aktivnost modula higBA2. Prisotnost modula higBA2 divjega tipa v Escherichia coli ni vplivala na tvorbo perzistentnih celic, modul tako ni primerna tarča za razvoj zdravil v boju proti perzistentnim sevom Vibrio cholerae.[I. Černoša]20202020-06-20 07:15:04Magistrsko delo/naloga117027UDK: 602.64:579.8:604.4:579.1:544.01(043.2)VisID: 175859COBISS_ID: 21863683sl