Odziv protoplastov kalusnih celic koruze na acetilholin in agoniste acetliholinskih receptorjevSkok, Sara (Avtor) Regvar, Marjana (Mentor) Kreft, Marko (Komentor) AcetilholinnikotinpilokarpinprotoplastikaluskoruzaHUVECfluorescencakalcijV magistrski nalogi smo preverjali odziv celic in protoplastov, pridobljenih iz kalusnega tkiva koruze, na dodatek acetilholina in agonistov acetilholinskih receptorjev. Razvoj kalusa smo inducirali z nacepom mladih poganjkov na gojišče Murashige-Skoog z dodatkom sintetičnega avksina 2,4-D [3 mg/L]. Odzivanje celic in protoplastov s povišanjem [Ca2+]i ob izpostavitvi 60 µM acetilholin-jodidu, nikotinu ali pilokarpin-hidrokloridu smo spremljali prek sprememb v intenziteti fluorescence celic po stimulaciji. Za zaznavo sprememb v [Ca2+]i smo uporabili fluorescenčni indikator za Ca2+ ione, Fluo-4-AM. Ne glede na uporabljeni stimulans v izbrani koncentraciji, pri protoplastih in kalusnih celicah nismo opazili odziva, tj. spremenjene [Ca2+]i, ki bi se statistično značilno razlikoval od negativne kontrole (celice in protoplasti stimulirani s hranilno raztopino). Povišanja [Ca2+]i v času stimulacije so sicer bila prisotna, a so bila najverjetneje posledica mehanskega vzdraženja ob dodatku raztopin. Rezultati torej kažejo na odsotnost acetilholinskih receptorjev pri nediferenciranih celicah koruze oziroma, v primeru njihovega morebitnega obstoja, njihovo neodzivnost na uporabljeno koncentracijo 60 µM acetilholin-jodida, nikotina ali pilokarpin-hidroklorida. Odziv celic in protoplastov koruze na ionomicin je bil neznačilen. Kot pozitivna kontrola za so bile v eksperimentu uporabljene celice HUVEC. Ob izpostavitvi celic acetilholin-jodidu, nikotinu ali pilokarpin-hidrokloridu smo opazili odzive, tj. povišanje [Ca2+]i, ki so bili statistično značilno različni od negativne kontrole (HUVEC stimulirane z zunajcelično raztopino z 10 mM glukozo). Rezultati torej potrjujejo zaznavo 60 µM acetilholin-jodida, nikotina in pilokarpin-hidroklorida ter odzivnost celic HUVEC. Sprememba [Ca2+]i po izpostavitvi HUVEC ionomicinu je bila statistično značilna.20202020-06-13 07:15:04Magistrsko delo/naloga116843VisID: 175851COBISS_ID: 22398723sl