Izražanje gena za (pro)katepsin X v celični liniji PC-12 ob prisotnosti amiloida betaŠketelj, Blaž (Avtor) Doljak, Bojan (Mentor) (pro)katepsin Xamiloid betacelična linija PC-12nevrodegeneracijaV okviru magistrske naloge smo želeli preveriti ali citotoksični fragment Aβ(25-35) vpliva na izražanje gena za (pro)katepsin X v celični liniji PC-12. Celična linija PC-12 predstavlja dober model za preučevanje nevrodegeneracije, saj izraža tudi katepsin X v neaktivni obliki prokatepsina X, ki se nahaja v lizosomih. Nediferencirane celice PC-12 smo inkubirali z Aβ(25-35) v osmih časovnih intervalih (po 3 ure) in v lizatih celic s testom ELISA izmerili količino (pro)katepsina X ter s kinetično metodo encimske aktivnosti s fluorogenim substratom izmerili množino aktivnega katepsina X. Rezultate smo normirali na količino celokupnih proteinov, ki smo jih kvantificirali z metodo po Lowry-ju. Ugotovili smo, da se količina celokupnega katepsina X (pro in aktivna oblika) statistično značilno poveča že v 3 urah inkubacije z Aβ(25-35) in ostane povišana vse do 12 ur, kar bi lahko bilo posledica nespecifičnega stresnega odgovora celic na vstop amiloidnega peptida v celico. Izpostavitev Aβ(25-35) ne vpliva statistično značilno na množino aktivnega katepsina X v celicah PC-12, saj ostaja kljub povečanem izražanju gena za (pro)katepsina X, množina aktivnega katepsina X znotraj celic bolj ali manj konstantna. Morebitno izločanje aktivnega katepsin X iz celic v gojišče bi lahko potrdili z meritvijo encimske aktivnosti katepsina X v samem gojišču. Modelne celice PC-12 se torej odzivajo na prisotnost Aβ(25-35) v gojišču z nadizražanjem znotrajcelično izmerjenega prokatepsina X, kar bi lahko pomenilo nov molekulski mehanizem v obrambi pred amiloidom.20202020-02-21 08:35:03Magistrsko delo/naloga114254VisID: 72770sl