Test inhibitorjev 6-fosfofrukto-1-kinaze za zmanjšano produkcijo laktata pri izbranh tumorigenih celičnih linijah.Krajnc, Valentina (Avtor) Legiša, Matic (Mentor) metabolizemrak6-fosfofrukto-1-kinazalaktatNADHinhibitorjiZa deregulirano glikolizo pri rakavih celicah naj bi bila odgovorna posttranslacijska modifikacija encima 6-fosfofrukto-1-kinaza (PFK1). Testirali smo vpliv dveh inhibitorjev v različnih koncentracijah na encim PFK-P in na kopičenje laktata pri tumorigenih in netumorigenih celičnih linijah. Uporabili smo tumorigene celične linije Caco-2, MDA-MB-231, MCF-7, Colo829 in kontrolno netumorigeno celično linijo MCF-10A. Uporabili smo tudi netumorigene celice HEK293-T-REx, ki so bile transficirane z nativnim humanim genom za mišični tip PFK-M in celice z modificiranim humanim genom, ki nosi zapis za kratek PFK-M fragment ter celice HK293-T-REx brez vključkov. Pri celicah MCF-10A inhibitorja nista vplivala na nastajanje laktata, pri tumorigenih celicah MCF-7 smo opazili koncentracijsko odvisno zmanjševanje produkcije laktata ob prisotnosti inhibitorjev. Inhibitorja delujeta predvsem na obliki PFK-P in PFK-M. Z metodo masne spektrometrije smo pri celicah določali vsebnost izbranih metabolitov glikolize. Pri celicah, tretiranih z inhibitorjem številka 3, se kopičijo metaboliti, ki so v metabolni poti pred nivojem PFK1, manjša je količina metabolitov, ki so v metabolni poti za encimom PFK1. Ti rezultati nakazujejo, da so izoencimi PFK1 tarče za inhibitorje. Inhibitorji niso citotoksično vplivali na celične linije. Po koncu poskusa smo ugotovili, da nekatera uporabljena gojišča niso bila primerna za naš test, saj njihova sestava ni bila podobna sestavi humanega seruma in niso spodbujala deregulirane glikolize.[V. Krajnc]20202020-02-19 07:45:52Magistrsko delo/naloga114136UDK: 601.2:576.34:604.2:661.74(043.2)VisID: 175680COBISS_ID: 18019843sl