Meritve znotrajceličnega laktata v različnih morfotipih izoliranih primarnih astrocitovGošnjak Prah, Urška (Avtor) Kreft, Marko (Mentor) Stenovec, Matjaž (Komentor) astrocitiFRETlaktatpHAstrociti so morfološko raznolika skupina celic CŽS, ki imajo ključno vlogo pri vzdrževanju možganske homeostaze. Nevroni so energetsko odvisni od astrocitov, ki iz krvožilja sprejemajo glukozo in sintetizirajo glikogen. Pomemben končni produkt razgradnje glikogena je laktat, ki se preko monokarboksilatnih transporterjev iz astrocitov prenese v nevrone, ki ga izrabijo kot alternativni vir energije, ko ni dostopna glukoza iz krvožilja. Draženje astrocitnih adrenergičnih receptorjev aktivira cAMP signalno pot in sproži glikolizo. Za poskuse smo izbrali Försterjev resonančni prenos energije, ki je občutljiva mikroskopska tehnika za merjenje fizioloških procesov posameznih celic. Za spremljanje spremembe koncentracij laktata ([laktat]i) smo uporabili gensko kodiran nanosenzor Laconic, za spremembe pHi pa reagent pHrodoTMGreen. Primerjali smo metabolizem glukoze v dveh morfotipih astrocitov (s poligonalno in zvezdasto morfologijo in vivo), vzgojenih po dveh različnih protokolih z različnima sestavama hranilnega gojišča (dodatek fetalnega govejega seruma ali dodatek HB-EGF). Adrenergično draženje je izzvalo podobne odzive v obeh morfotipih. Intenzivna možganska dejavnost pomeni nastajanje visokih koncentracij znotrajceličnega laktata, ki lahko zakisajo citosol. V nalogi smo zato izmerili časovno-odvisno spremembo pHi v celicah, ki smo jih izpostavili različnim koncentracijam laktata. Zunajcelični dodatek laktata nizke koncentracije (5 mM) povzroči padec pHi, ki ga celica v času merjenja uravna do začetnih pHi vrednosti, medtem ko zunajcelični dodatek laktata visoke koncentracije (20 mM) celica v času merjenja ne zmore uravnati do prvotnih vrednosti.20192019-11-21 07:45:21Magistrsko delo/naloga112910VisID: 175015COBISS_ID: 5326927sl