Priprava plazmida za antiangiogeno terapijo raka brez gena za odpornost proti antibiotikuBlažič, Anja (Avtor) Ambrožič Avguštin, Jerneja (Mentor) Kamenšek, Urška (Komentor) plazmidirekombinantni plazmidzdravljenje rakaantiangiogena terapija rakamolekulsko kloniranjemolekula shRNAtehnologija ORTAntiangiogena terapija spada med žilno ciljane terapije, ker omogoča lokalno ciljanje različnih tarč v tumorskem žilju, med katere spadata tudi gena Eng (endoglin) – CD105 in Mcam (celična adhezijska molekula melanoma) – CD146. Eden izmed načinov utišanja prekomerno izraženih genov je s tehnologijo RNAi (small interfering RNA, RNA interferenco), vendar je za dolgotrajnejšo učinkovitost bolj smiselna dostava molekule shRNA (kratka lasnična molekula RNA) na plazmidih. Namen naloge je bila priprava plazmida za utišanje izražanja genov CD105 in CD146, brez gena za odpornost proti antibiotiku, za uporabo v antiangiogeni terapiji raka. Z metodami molekulskega kloniranja smo uspešno pripravili plazmid brez gena za odpornost. Plazmid smo s transfekcijo vstavili v celice in dokazali uspešnost utišanja obeh tarčnih genov z metodo RT-PCR - verižna reakcija s polimerazo v realnem času. Gena za odpornost smo odstranili s tehnologijo ORT - operator supresorska titracija in tako zagotovili varnost po standardu regulatornih agencij. Funkcionalnost plazmida brez gena za odpornost se ohrani ali celo poveča, in ne vpliva na zmanjšanje izražanja kloniranih genov. Dodatno smo s testom citotoksičnosti pokazali, kako vnos samega plazmida vpliva na preživetje tretiranih celic.[A. Blažič ]20192019-09-22 07:47:58Magistrsko delo/naloga111079UDK: 602.6/.8:616-006:577.2VisID: 169882COBISS_ID: 5101176sl