Priprava pasjih matičnih celic kot dostavni sistem interlevkina 12 za zdravljenje tumorjev.Pirih, Nina (Avtor) Majdič, Gregor (Mentor) Kamenšek, Urška (Komentor) pasje matične celicemezenhimske matične celiceinterlevkin 12IL-12imunoterapijaraktumortransfekcijaelektroporacijagenski elektroprenoslipofekcijadostavni sistemMezenhimske matične celice zaradi svojega širokega potenciala diferenciacije v različne vrste celic in produkcije rastnih faktorjev in različnih komponent zunajceličnega matriksa, ponujajo številne možnosti uporabe v terapevtske namene. Poleg njihove uporabe pri regeneraciji tkiv in modulaciji imunskega sistema, lahko služijo tudi kot dostavni sistemi pri zdravljenju rakavih obolenj, saj raziskave kažejo, da mezenhimske matične celice pogosto migrirajo k tumorskim tkivom. Citokin interlevkin 12 (IL-12) zaradi svoje sposobnost aktivacije naravne in pridobljene imunost ter stimulacije produkcije citokina interferona ?, ki koordinira protitumorsko obrambo, predstavlja idealnega kandidata za tumorsko imunoterapijo. Cilj naloge je bil z ne-virusnimi metodami pridobiti linijo stabilno transfeciranih pasjih matičnih celic, ki bi v zadostni meri proizvajale IL-12, da bi lahko potencialno služile v namen protitumorske terapije pri psih. V nalogi smo uporabili metodo elektroporacije in lipofekcije. Z uporabo reporterskega plazmida pEGFP N1 smo optimizirali pogoje elektroporacije, ki smo jih kasneje uporabili pri elektroporacijah s terapevtskim plazmidom pcDNA3.1zeo+sccaIL12. V optimizacijo smo vključili elektroporacijske parametre, število celic/elektroporacijo, količino plazmidne DNA/elektroporacijo in vrsto elektroporacijskega pufra. Stabilne linije pasjih matičnih celic, ki bi izražale caIL-12, nam po večkratnih poskusih elektroporacije in selekcije ni uspelo pridobiti, vendar smo s qPCR metodo uspeli dokazati prehodno izražanje caIL-12 na mRNA nivoju. Rezultati magistrskega dela so postavili dobre temelje za transfekcijo pasjih matičnih celic pridobljenih iz maščobnega tkiva.[N. Pirih]20192019-09-22 07:47:43Magistrsko delo/naloga111074UDK: 602.9:591.81:602.64(043.2)VisID: 169877COBISS_ID: 9345913sl