Vpliv egerolizinov na fiziologijo celic kvasovke Saccharomyces cerevisiaeSoldat, Mladen (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) Skočaj, Matej (Komentor) Saccharomyces cerevisiaeostreolizinnigerolizinholesterolsfingomielinceramid-fosfoetanolaminEgerolizini so proteini, ki so značilni predvsem za bakterije in glive, najdemo pa jih tudi pri nekaterih rastlinah in virusih. Njihova biološka vloga ni natančno znana, predvideva pa se, da naj bi imeli vlogo pri procesih kot so modulacija bakterijske sporulacije ter virulenca in razvoj plodnih telesc pri glivah. Osnovna značilnost egerolizinov je, da se vežejo na in prepoznajo specifične lipide, lipidne domene ali lipidne mešanice v membranah živih celic in v umetnih lipidnih sistemih. V skupino egerolizinov sta uvrščena tudi proteina ostreolizin A (OlyA) in nigerolizin A2 (NigA2). V okviru magistrske naloge smo želeli egerolizina OlyA in NigA2 izraziti v kvasovki Saccharomyces cerevisiae ter preveriti, ali vplivata na kopičenje nevtralnih lipidov. Egerolizina OlyA in NigA2 smo izražali s pomočjo ekspresijskega plazmida pYES2, ki vsebuje inducibilni promotor GAL1. Izražanje rekombinantnih proteinov smo inducirali z galaktozo in s točkovnim nanosom celokupnih proteinov na poliviliden-difluoridno membrano preverili prisotnost oziroma izražanje rekombinantnih egerolizinov. Količino nevtralnih lipidov v obliki lipidnih kapljic smo v rekombinantnih celicah preverili z barvilom nilsko rdeče in uporabo fluorescenčnega mikroskopa. Primerjava reprezentativnih fluorescenčnih slik kvasovke S. cerevisiae s praznim plazmidom (negativna kontrola) in rekombinantnimi plazmidi nakazuje, da egerolizina OlyA in NigA2 vplivata na kopičenje nevtralnih lipidov v obliki lipidnih kapljic v celicah kvasovke S. cerevisiae.20192019-09-19 07:45:38Magistrsko delo/naloga110744VisID: 169356COBISS_ID: 5204047sl