Izolacija in karakterizacija zunajceličnega polisaharida EpsA-O pri bakteriji Bacillus subtilisKrajnc, Mojca (Avtor) Dogša, Iztok (Mentor) Bacillus subtilisEPSpolisaharid EpsA-ObiofilmčistostreologijaPri bakteriji Bacillus subtilis je tvorba biofilmov eden izmed najpomembnejših prilagoditvenih procesov. Tvorbo biofilmov omogočajo zunajcelične polimerne snovi (EPS), katerega sestaven del je polisaharid EpsA-O, ki je nujen za tvorbo zrelega biofilma. Z gojenjem visokoproduktivne mutante seva B. subtilis (?sinR) na trdnem gojišču MSgg s povečano koncentracijo glicerola smo po 24 urni inkubaciji pridobili zunajcelični material iz katerega smo izolirali polisaharid EpsA-O. Kot negativna kontrola pridobitve polisaharida EpsA-O nam je služila mutanta seva B. subtilis ?epsA-O. Osredotočili smo se na čistost, reologijo in HPSEC analizo izolatov. Na mikroskopskem, makroskopskem in biokemijskem nivoju smo opazili razlike med visokoproduktivnim sevom in negativno kontrolo. Razlike v izoliranem materialu sevov ?sinR in ?epsA-O so prisotne tudi na kromatogramih, ki smo jih dobili z metodo HPSEC. Kromatogram refrakcijskega indeksa seva ?sinR ima dodaten vrh, za katerega sklepamo, da pripada polisaharidu EpsA-O in spada v velikostni razred > 3000 kDa. S spremljanjem čistosti izolatov smo ugotovili, da največ nečistot predstavljajo biološke molekule, ki absorbirajo svetlobo v UV delu spektra, ključen korak čiščenja predstavlja sprememba pH raztopine. Z reološkimi metodami smo potrdili, da je viskoznost raztopin izolatov večja, če smo bakterije gojili na trdnem in ne na tekočem gojišču. Prav tako smo ugotovili, da je obnašanje raztopin izolatov seva ?sinR psevdoplastično do zelo nizkih koncentracij, medtem ko se izolati iz seva ?epsA-O obnašajo kot Newtonske tekočine. Visoka intrinzična viskoznost je v skladu s HPSEC velikostno oceno polisaharida EpsA-O. Z oscilacijskim testom smo ugotovili, da prečiščen izolat pri koncentraciji 1 % pridobi strukturne lastnosti gela, vsi vzorci pod to koncentracijo imajo strukturne lastnosti viskoelastičnih tekočin.[M. Krajnc]20192019-09-14 07:46:57Magistrsko delo/naloga110440UDK: 602.3:579.852.11:604.2:547.458(043.2)VisID: 168584COBISS_ID: 9363065sl