Možnosti reprogramiranja in transdiferenciacije celic z uporabo aktivatorjev CRISPR.Doneva, Angela (Avtor) Ogorevc, Jernej (Mentor) CRISPR sistemdCas9CRISPRamatične celiceiPSC-inducirane matične celicereprogramiranje celictransdiferenciacijaReprogramiranje celic in transdiferenciacija pomenita spreminjanje identitete in funkcije celic. V diplomski nalogi sva pregledala literaturo in preučila možnosti za reprogramiranje in transdiferenciacijo celic z uporabo aktivatorjev vezanih na encim Cas, ki je del CRISPR/Cas ribonukleoproteinskega kompleksa. Sistem CRISPR/Cas je zelo popularno orodje za urejanje genoma, uporaben pa je tudi za uravnavanje izražanja različnih genov. Temelji na vzpostavitvi kompleksa vodilne RNA (sgRNA – single guide RNA), ki določa tarčno regijo, in proteina Cas. Ob določenih modifikacijah je sistem uporaben tudi za drugačno aplikativno rabo. Ena od takšnih modifikacij je zamenjava proteina Cas9 z mutirano obliko, ki nima endonukleazne aktivnosti (»dead« Cas9-dCas9). Dokazano je bilo, da fuzija transaktivacijskih domen na dCas9, ob vezavi na tarčna mesta v genomu, inducira izražanje tarčnih genov, s čimer lahko dosežemo reprogramiranje celic v pluripotentno stanje oziroma jih diferenciramo v želeni celični tip. V literaturi smo poiskali primere, kjer je bila tehnologija že uspešno uporabljena v ta namen in poskušali bomo ovrednotiti prednosti in slabosti regulacije genov, ki temelji na CRISPR/dCas9[A. Doneva]20192019-09-14 07:46:55Diplomsko delo/naloga110439UDK: 602.641:602.9:611.018(043.2)VisID: 168583COBISS_ID: 9369977sl