Priprava rekombinantne zunajcelične domene proteina EGFR in njegovega interakcijskega partnerja EGFLatysheva, Daria (Avtor) Lenarčič, Brigita (Mentor) EGFREGFEpCAMEGFR je transmembranski glikoprotein, ki igra pomembno vlogo pri nastanku in razvoju raka. Pred kratkim so ugotovili, da zunajcelična domena proteina EpCAM (EpEX) deluje kot ligand EGFR. Interakcija med proteinoma je šibka, zato je za analizo interakcije potrebno uporabiti metodo za analizo šibkih in prehodnih interakcij, kot je na primer analiza agregacije kroglic (BAA). Za preučevanje interakcij med temi proteini z metodo BAA je potrebno pripraviti rekombinantni protein EGFR-Ex z FC-regijo, hkrati pa je potrebno način vezave EpEX na EGFR primerjati z interakcijo med EGFR in EGF, ki je znan ligand EGFR. V sklopu diplomskega dela smo se osredotočili na pripravo rekombinantnega proteina EGFR-Ex z FC-oznako in EGF. Za EGFR-Ex smo pripravili DNA konstrukt s FC-regijo, vendar ga nismo uspeli izraziti v bakulovirusnem sistemu. Za protein EGF smo pripravili DNA-konstrukt z inteinom Mxe GyrA in pomožnim proteinom SUMO, ki omogočata pravilno zvitje proteina EGF. Konstrukt EGF smo izrazili v bakterijah E. coli BL21[DE3].20192019-09-09 10:50:14Diplomsko delo/naloga109856VisID: 6468COBISS_ID: 1538395331sl