Uporaba tehnologije CRISPRi pri bakteriji Bacillus subtilisZaharieva, Marija (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Blažič, Marko (Komentor) biotehnologijaCRISPRidCas9Bacillus subtilisGFPBakterija Bacillus subtilis je dober modelni mikroorganizem za proučevanje različnih procesov v celici, kot so metabolizem, genska regulacija in bakterijska diferenciacija. Na voljo imamo dobro razvite metode za gensko manipulacijo, zato je B. subtilis zelo privlačen kot gostiteljski sistem za uporabo metabolnega inženirstva. Uspešno izražanje genov in njihova regulacija sta namreč ključni za razvoj industrijskih sevov. Genska tehnologija nam omogoča vstavljanje novih genov, prekinitev neželjenih genov ter kontroliranje izražanja genov. Leta 2013 je bila razvita nova metoda za urejanje genoma CRISPR/Cas9 (clustered regularly interspaced palindromic repeats s Cas9 proteinom), ki temelji na uporabi sistema za obrambo pred virusnimi okužbami pri bakterijah. Je učinkovita, enostavna in poceni metoda za urejanje genoma. Omejitev CRISPR/Cas9 je v tem, da včasih ne želimo inducirati preloma DNA in njene inaktivacije oziroma modifikacije. Ampak želimo samo inhibirati izražanje gena. Za ta namen se uporablja metoda CRISPRi/dCas9, s katero se lahko regulira transkripcijo. Metoda je zelo uporabna v proučevanju in izražanju esencialnih genov. V nalogi smo uspeli eksperimentalno pokazati delovanje metode CRISPRi/dCas9 na primeru proteina GFP (green fluorescent protein) v B. subtilis. Encim dCas9 ni rezal gena, ki kodira GFP (kar bi se pokazalo kot popolna odsotnost zelene fluorescence), ampak je le zmanjšal njegovo izražanje (manjša intenziteta zelene fluorescence).[M. Zaharieva]20192019-09-08 07:46:56Diplomsko delo/naloga109806UDK: 602.6:579.852.11(043.2)VisID: 167620COBISS_ID: 9364345sl