Preučevanje vpliva modulatorjev N-acetilglukozaminilacije na proliferacijo nevroblastomske celične linije SH-SY5YViler, Tina (Avtor) Gobec, Martina (Mentor) Weiss, Matjaž (Komentor) N-acetilglukozaminilacijaencim OGTencim OGAproliferacijacelična linija SH-SY5YN-acetilglukozaminilacija je posttranslacijska modifikacija številnih jedrnih, citoplazemskih in mitohondrijskih proteinov. Preko moduliranja signalnih poti vstopa v interakcijo s potmi fosforilacije in je, kakor ta vpeta v regulacijo mnogih celičnih procesov. Vlogo naj bi imela celo v etiologiji nekaterih kroničnih bolezni. Uravnavata jo dva encima, O-GlcNAc transferaza in O-GlcNAc hidrolaza, ki sta v največji meri prisotna v možganih, imunskih celicah in trebušni slinavki. V magistrski nalogi smo se osredotočili na preučevanje vpliva modulatorjev N-acetilglukozaminilacije na proliferacijo celic SH-SY5Y, z namenom dokaza morebitne vpletenosti N-acetilglukozaminilacije v patologijo nevroblastoma oz. drugih nevroloških obolenj. Uporabljena celična linija SH-SY5Y, je nevroblastomska linija, ki se uporablja kot in vitro model za raziskovanje nevronskih vlog. V prvem delu smo s testom metabolne aktivnosti najprej preverili morebitni vpliv selektivnega zaviralca OGT – OSMI-1 in selektivnega zaviralca OGA - TMG na živost celic SH-SY5Y. Ugotovili smo, da je OSMI-1 (50 µM) za celice toksičen, medtem ko TMG nanje, ni imel vpliva. Nadalje smo uporabili netoksične koncentracije spojin in preverili učinek na proliferacijo celic SH-SY5Y. Pokazal se je trend, vendar razlike niso bile statistično značilne, zato vpliva nismo mogli potrditi. Ravno tako se pod vplivom omenjenih spojin, s pomočjo pretočnega citometra niso pokazale spremembe v celičnem ciklu. V naslednjem koraku smo kljub neuspešnemu dokazu o vplivu na proliferacijo, želeli s pomočjo prenosa western raziskati še vpliv OSMI-1, TMG in vsebnosti glukoze v mediju, na N-acetilglukozaminilacijo proteinov ter izražanje encimov OGT in OGA. OSMI-1 je zavrl N-acetilglukozaminilacijo in izražanje OGA, pri čemer se je izražanje OGT povečalo. TMG je deloval ravno nasprotno in izzval povečanje N-acetilglukozaminilacije in izražanje OGA, izražanje OGT pa se je zmanjšalo. Kjer je bila vsebnost glukoze v mediju višja je prišlo do višje stopnje N-acetilglukozaminilacije in izražanja OGT. V zadnjem delu smo s konfokalnim fluorescenčnim mikroskopom dokazali premik encima OGT iz jedra v citoplazmo celice ob dodatku OSMI-1. To bi lahko nakazovalo na spremembe v znotrajcelični signalizaciji in torej morebitno vpletenost drugih signalnih poti v smrtnost celic, v primeru dodatka spojine OSMI-1.20192019-08-30 08:35:02Magistrsko delo/naloga109326VisID: 68971sl