Karakterizacija vpliva aminokislinskih derivatov sukcinimida na aktivnost katepsina LObaha, Ana (Avtor) Novinec, Marko (Mentor) peptidazainhibicijaalosterična regulacijaČloveški katepsin L je papainu podobna cisteinska endopeptidaza izražena v večini celic. Ima pomembno vlogo pri razgradnji proteinov, predstavitvi antigenov in regulaciji celičnega cikla. Namen naše raziskave je bil identificirati alosterične inhibitorje katepsina L. Slednji imajo prednost pred ortosteričnimi, saj zagotavljajo večjo specifičnost vezave. Kot tarčno alosterično mesto smo si izbrali tisto, kamor se dokazano vežejo alosterični efektorji na katepsinu K, ki sodi v družino katepsinu L podobnih peptidaz. Kot potencialne inhibitorje smo testirali spojine, ki so bile sintetizirane kot možni inhibitorji katepsina K in S. Testiranja smo izvedli z meritvijo aktivnosti encima s fluorogenim substratom Z-LR-AMC. Identificirali smo 12 linearnih in 5 hiperboličnih inhibitorjev. Da pa bi preverili, ali se spojina res veže v alosterično mesto, smo naredili mutanto, ki ima pet aminokislinskih ostankov v alosteričnem mestu zamenjanih s tistimi iz sorodnega katepsina V. Kot najboljši inhibitor s hiperboličnim mehanizmom delovanja se je izkazala spojina 2. Z logistično enačbo s štirimi parametri smo določili faktor EC50 670 ± 300 µM. Spojina zmanjša aktivnost encima za 30 %. Afiniteta vezave se pri mutiranih oblikah encima spremeni, zato lahko trdimo, da se veže v tarčno alosterično mesto.20192019-08-29 08:55:08Diplomsko delo/naloga109289VisID: 6234COBISS_ID: 1538301635sl