Histokemijsko določanje ß-glukanov v zrnih ječmenaKeber, Urška (Avtor) Vogel-Mikuš, Katarina (Mentor) ječmenJečmen je eno od najstarejših žit na svetu in spada v botanično družino trav (Poaceae). Glavna gradbena komponenta notranjega dela celičnih sten škrobnega endosperma so (1→3),(1→4)-β-D-β-glukani. To so linearni polisaharidi, ki spadajo v skupino prehranskih vlaknin in so pomemben del človekove prehrane. Glavni nalogi β-glukanov sta stabilizacija rastlinske celične stene ter mobilizacija nastale energije pri njihovi hidrolizi. Namena našega raziskovalnega dela sta bila histokemijska lokalizacija β-glukanov v zrnu ječmena ter ovrednotenje intenzitete fluorescence pri štirih vrstah ječmena kot osnova za semi-kvantitativno določanje vsebnosti beta glukanov. Kot izhodni material smo vzeli po nekaj zrn treh različnih sort ječmena z že znanimi vsebnostmi β-glukanov ter nekaj zrn sorte ječmena z neznano vsebnostjo β-glukanov. Vzorce smo s tehniko zamrzovanja in odmrzovanja (angl. freeze-thaw) pripravili za rezanje in barvanje. Pri barvanju smo uporabili dve fluorescentni barvili, kalkofluor beli (Sigma-Aldrich) in fluorestentni osvetljevalec 28 (Sigma-Aldrich), ki se vežeta na β-1,3 in β-1,4 polisaharide. Ugotovili smo, da se β-glukani nahajajo znotraj zrna ječmena, natančneje v škrobnem endospermu in alevronski plasti. Na slikah pobarvanih rezin vzorcev smo pomerili intenziteto fluorescence s programom ImageJ. S pomočjo povprečnih vrednosti intenzitete fluorescence smo izdelali umeritveno krivuljo, s pomočjo katere smo določili vsebnost β-glukanov v zrnu ječmena z neznano vsebnostjo β-glukanov. Zaključimo lahko, da je histokemijska metoda primerna za semi-kvantitativno določanje količine β-glukanov v zrnih ječmena, pri čemer jih lahko razdelimo v razrede z manjšo, srednjo in veliko vsebnostjo β-glukanov.20192019-07-30 05:33:49Diplomsko delo/naloga108846COBISS_ID: 12534089sl