Izražanje transgenov v enojedrnih celicah periferne krvi in njihova karakterizacijaKomel, Tilen (Avtor) Rajčević, Uroš (Mentor) enojedrne celice periferne krvielektroporacijahimerni antigeni receptortranspozonAdoptivna celična terapija, ki temelji na uporabi gensko modificiranih limfocitov-T reprogramiranih za prepoznavo določenih tumor-specifičnih antigenov se je izkazala za uspešno metodo zdravljenja nekaterih vrst rakavih obolenj. Uspešnost je bila dokazana predvsem pri nekaterih terapijah B-celičnih levkemij, kot je naprimer akutna limfoblastna levkemija ter nekaterih ne-hodgkinovih limfomov. Pri tem so bili uporabljeni s himernim antigenskim receptorjem spremenjeni limfociti T (CAR-T) usmerjeni proti označevalcu CD19, značilnemu za limfocite B. V okviru magistrske naloge smo skušali s pomočjo elektrogenskega prenosa v humane enojedrne celice periferne krvi (PBMC) vstaviti zapis za anti-CD19 CAR. Določili smo optimalne pogoje za nespecifično aktivacijo in razmnoževanje gensko spremenjenih PBMC. Z uporabo plazmida z zapisom za GFP smo optimizirali pogoje elektroporacije. Celice smo okarakterizirali s pretočno citometrijo in fluorescenčno mikroskopijo. Optimalni pogoji transfekcije za sočasni vnos plazmidov z zapisom za CAR in encim transpozazo, ki je omogočila trajno spremembo genoma limfocitov T so bili pri enem pulzu napetosti 2250V in trajanju 20 ms. Prisotnost CAR smo dokazali neposredno s pretočno citometrijo in posredno z funkcijskim ELISA testom, kjer smo dokazovali prisotnost IL-2.[T. Komel]20192019-07-10 07:45:34Magistrsko delo/naloga108616UDK: 606:616-056.7:602.621(043.2)VisID: 164034COBISS_ID: 9259641sl