Vpliv alelov gena MKT1 na odpornost kvasovke Saccharomyces cerevisiae proti kofeinu in rapamicinuKogovšek, Peter (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) kvasovkaSaccharomyces cerevisiaeCRISPR-Cas9 sistemzamenjava alelovgen MKT1sev AWRI1631sevBY4741redčitvena linijakofeinrapamicinNamen naloge je bil primerjava funkcije alelov gena MKT1 v različnih genetskih ozadjih kvasovke Saccharomyces cerevisiae. Gen MKT1 vpliva na procesiranje več različnih RNA molekul, s čimer sodeluje v več celičnih procesih. Izbrali smo dvajset segregant križanja dveh izbranih sevov kvasovke S. cerevisiae, ki so imele isti alel gena MKT1. Z metodo CRISPR-Cas9 smo najprej izvedli delecijo gena MKT1 v vseh segregantah, nato pa smo v genom segregant vstavili alel gena MKT1, ki izhaja iz drugega starševskega seva teh segregant. Želeli smo ugotoviti razliko v rasti med variantami z različnimi aleli na gojiščih, ki vsebujejo kemikalije, ki aktivirajo signalno pot TOR. Zato smo variante segregant nacepili na plošče s kofeinom in rapamicinom in jih medsebojno primerjali po odpornosti. Pri vseh pogojih so variante z aleloma MKT1BY in mkt1Δ rasle enako, iz česar sklepamo, da je Mkt1BY nefunkcionalen protein. Na ploščah s kofeinom pri polovici sevov ni bilo razlik v rasti med variantami alelov, pri drugi polovici pa je varianta z alelom MKT1AWRI rasla slabše od drugih dveh. Iz tega smo postavili hipotezo, da na odpornost proti kofeinu gen MKT1 vpliva skupaj s še enim genom. Na gojišču z rapamicinom so se segregante glede na rast razdelile v tri skupine. Iz tega sklepamo, da je odpornost proti rapamicinu kompleksna oziroma poligenska lastnost. Da bi ugotovili, kateri in koliko genov še sodeluje v odpornosti proti rapamicinu in kofeinu, bi morali sekvencirati genome segregant in primerjati razporeditev SNP med njimi.20192019-07-10 07:45:26Magistrsko delo/naloga108614VisID: 164032COBISS_ID: 5119055sl