Prepoznava aminokislinskih ostankov proteina gp6 bakteriofaga GIL01 bakterije Bacillus thuringiensis ključnih za aktivacijo litičnega promotorjaČeh, Tjaša (Avtor) Butala, Matej (Mentor) Bacillus thuringiensistemperatni bakteriofag GIL01gp6litični promotor P3odziv SOSTemperatni bakteriofag (fag) GIL01 okužuje bakterijo Bacillus thuringiensis. Ob okužbi lahko v gostitelju vzpostavi litični ali lizogeni cikel. Nedavne raziskave kažejo, da so geni faga GIL01 prepisani s treh promotorjev. Litični promotor P3 nadzira prepis poznih genov za sintezo kapside in sprostitev fagov iz bakterije. Promotor P3 aktivira protein gp6, katerega gen je prepisan po poškodbi DNA s promotorja P1 faga GIL01. Protein s svojo vezavo na promotor P3 olajša vezavo RNA-polimeraze in aktivira prepis genov. Z izbranima oligonukleotidnima začetnikoma ter z DNA polimerazo Phusion smo na plazmidu uvedli točkovne mutacije v zapis za protein gp6. Sprožili smo sintezo divjega tipa proteina gp6 ali njegovih različic v sevu B. thuringiensis, ki je vključeval plazmid s poročevalskim genom lacZ pod kontrolo promotorja P3. Z beta-galaktozidaznim testom smo analizirali vpliv proteina gp6 ali njegovih različic na aktivnost P3. Z metodo površinske plazmonske resonance smo pokazali, da se protein gp6 z mutacijama v aminokislinskih ostankih gp6 Y34A in gp6 E18A veže na promotorsko regijo. V magistrskem delu smo tako dokazali, da sta točkovni mutaciji v aminokislinskih ostankih gp6 Y34A in gp6 E18A pomembni za aktivacijo promotorja P3 in s tem litičnega cikla bakteriofaga GIL01.[T. Čeh]20192019-05-31 07:45:03Magistrsko delo/naloga107853UDK: 578.347:579.852.11:579.22/.26:577.2VisID: 163767COBISS_ID: 5058680sl