Vnos gena za visoko aktivno piruvat kinazo v kvasovko Saccharomyces cerevisiaeDolinar, Urška (Avtor) Legiša, Matic (Mentor) biotehnologijagenetikabioetanolSaccharomyces cerevisiaeprimarni metabolizemglikolizapiruvat-kinazaKvasovka Saccharomyces cerevisiae je eden izmed najpogosteje uporabljenih mikroorganizmov za proizvodnjo bioetanola. Z namenom pospešitve rasti seva kvasovke sfPFKM z modificirano obliko 45 kDa humanega encima 6-fosfofrukto-1-kinaza kot edino obliko encima s fosfofruktokinazno aktivnostjo, smo v ta sev vnesli dodatne kopije gena PYK1, ki kodira visoko aktiven encim piruvat-kinazo 1 (Pyk1) ter tako pridobili dvojno mutanto sfPFKM nPYK1. Predhodni testi so namreč pokazali, da na mestu delovanja Pyk1 obstaja ozko grlo v metabolnem pretoku med rastjo na maltoznem gojišču. Dvojna mutanta sfPFKM nPYK1 je na 0,5-odstotnem maltoznem minimalnem dopolnitvenem gojišču rastla hitreje kot izhodiščna enojna mutanta sfPFKM. Hitrejšo rast na tem gojišču smo opazili tudi pri nPFKM nPYK1 sevu, ki nosi zapis za nativni 85 kDa humani PFKM gen in ima vnešene dodatne kopije gena PYK1. Z nadaljnjimi modifikacijami izražanja kvasnih PYK1 genov v transformanti sfPFKM bi lahko odpravili ozko grlo v metabolnem pretoku preko glikolize in pripravili uporaben modelni organizem za študij deregulirane glikolize, kot jo povzroči modifikacija Pfk-M encima v rakastih celicah.[U. Dolinar]20192019-04-04 07:45:02Magistrsko delo/naloga107361UDK: 602.3:582.282.23:579.22/.25:602.6:582.28(043.2)VisID: 163581COBISS_ID: 9196921sl