Viabilnost in vezikulacija sesalskih celic po izpostavitvi s proteinom listeriolizinom OŠpilak, Ana (Avtor) Podobnik, Marjetka (Mentor) Bedina Zavec, Apolonija (Komentor) biologijazunajcelični veziklilisteriolizin Osesalske celične linijecelični odzivZunajcelični vezikli (ZV) so pomembni faktorji pri vrednotenju celičnega stanja. V magistrski nalogi smo želeli ugotoviti ali se števili večjih (vZV) in manjših zunajceličnih veziklov (mZV) spreminjata po izpostavitvi celic porotvornim proteinom (PFP) listeriolizinu O (LLO) in njegovima mutantoma LLOY406A in LLOA318C-L334C. Dokazano je, da obdelava celic z nekaterimi PFP povzroča povečano izločanje ZV, ni pa še znano, kako se celice odzovejo na LLO. Dosedanje študije so pokazale, da je LLOY406A pri fiziološkem pH neaktiven, pri znižanju pH pa se njegova aktivnost poveča. LLOA318C-L334C je v oksidiranem stanju zakljenjen v strukturo, ki onemogoča nastanek pore, v reduciranem stanju pa lahko tvori pore. Odziv celic na LLO in mutanta smo ovrednotili z določanjem viabilnosti celic in s spremljanjem količine ZV, ki so jih celice sprostile po izpostavitvi toksinom. Uporabili smo sesalske celične linije K-562, Jurkat in Caco-2. Viabilnost in vezikulacijo celic smo ugotavljali s pretočnim citometrom, dinamičnim sipanjem svetlobe, analizo sledenja nanodelcem in s konfokalnim mikroskopom. Ugotovili smo, da je preživetje celic najmanjše po učinkovanju z LLO pri pH 6, sledita mu LLO pri pH 7,4 in LLOY406A pri pH 6. LLOA318C-L334C ox prav tako vpliva na viabilnost celic, vendar v manjši meri, LLOY406A pri pH 7,4 pa ni litičen oziroma je šibko citolitičen. Po obdelavi celic z litičnimi koncentracijami LLO (pH 7,4 in pH 6) in LLOY406A (pH 6) celice močno vezikulirajo in izločajo več vZV in mZV glede na kontrolo. Pri koncentracijah, ki so 100-krat manjše od litične, pa celice v večini primerov izločijo manj vZV in mZV kot kontrolne. Odziv celic na LLOA318C-L334C ox je po količini izločenih ZV podoben kot pri kontroli. Dolgoročno bodo rezultati raziskave lahko doprinesli k uporabi PFP v farmacevtski industriji in v medicinske namene.20192019-03-18 11:10:27Magistrsko delo/naloga106785VisID: 163542COBISS_ID: 5046351sl