Izražanje genov za biosintezo likopena v kvasovki Yarrowia lipolyticaPrendl, Patricija (Avtor) Petrovič, Uroš (Mentor) Magdevska , Vasilka (Komentor) kvasovkeYarrowia lipolyticametabolni inženiringmetoda »Golden Gate«produkcija likopenaTerpeni so velika skupina organskih spojin, ki jih proizvajajo različni mikroorganizmi, rastline in tudi nekatere žuželke. Biosinteza poteka preko molekule izopentenil difosfat (IPP), ki je glavni gradnik za vse vrste terpenov. Terpeni se uporabljajo kot prehranska dopolnila v prehrani ljudi in živali ter v farmacevtski in kozmetični industriji. Med terpene uvrščamo tudi karotenoide, kamor spada likopen. Likopen je rdeče barvilo, ki ima izmed vseh karotenoidov najmočnejše antioksidativno delovanje. Z biotehnološkega vidika je za produkcijo likopena zanimiva oleogena kvasovka Yarrowia lipolytica, ki je sposobna v lipidnih kapljicah kopiči lipide do 20 % svoje suhe teže. Y. lipolytica po naravni metabolni poti ne producira likopena, saj se potencialna biosintezna pot likopena ustavi na stopnji intermediata geranilgeranil difosfata. Za preusmeritev metabolne poti do sinteze likopena so potrebni geni crtE, crtB in crtI. Ti geni imajo zapis za encime, ki katalizirajo metabolno pot od geranilgeranil difosfata do likopena. Gen crtE ima zapis za encim geranilgeranil difosfat sintazo, crtB fitoen sintazo in crtI fitoen desaturazo. V okviru magistrske naloge smo z metodo »Golden Gate« sestavili šest plazmidov, izmed katerih je vsak vseboval heterologne gene crtB, crtE in crtI, ki smo jih s transformacijo vstavili v Y. lipolytica. Uspeli smo pridobiti transformante, ki so sintetizirale likopen. V dušik omejujočem gojišču je bila produkcija likopena večja kot v gojišču YEPD in v gojišču z glicerolom kot edinim virom ogljika.20192019-02-07 07:45:24Magistrsko delo/naloga106180VisID: 163351COBISS_ID: 4987983sl