Vpliv sekrecije heterolognih encimov kvasovke Saccharomyces cerevisiae na njihovo aktivnostBešić, Emina (Avtor) Čadež, Neža (Mentor) Kranjc, Luka (Komentor) kvasovkeSaccharomyces cerevisiaerekombinantni proteinifitazaplazmidisignalno zaporedjeKvasovka Saccharomyces cerevisiae je tradicionalni biotehnološki organizem, ki se v zadnjih treh desetletjih uporablja za izražanje heterolognih proteinov na industrijskem nivoju. Prednost uporabe omenjenega organizma je sposobnost izločanja proteinov v gojišče, rast na preprostih substratih in nezahtevni pogoji kultivacije. Cilj naloge je bil testirati različna signalna zaporedja za izločanje fitaze v gojišče. Skonstruirali smo plazmida s konstitutivnim promotorjem PTEF1 in inducibilnim promotorjem PGAL1. Plazmida smo transformirali v sev S. cerevisiae INVSc1, kultivirali v sintetičnem gojišču brez uracila in z glukozo kot virom ogljika (SC-URA + GLU) ter primerjali zunajcelično in znotrajcelično fitazno aktivnost transformant s tema promotorjema. Pripravili smo plazmide s konstitutivnim promotorjem PTEF1 in s signalnimi zaporedji štirih različnih genov (MFα1, PLB1, CRH1, AGA2). Izmerili smo zunajcelično in znotrajcelično fitazno aktivnost v kompleknsem gojišču YPD in v gojišču SC-URA + GLU pri 28 °C in 37 °C. Pokazali smo, da vrsta gojišča vpliva na zunajcelično fitazno aktivnost. Sprememba temperature kultivacije ni imela vpliva na zunajcelično fitazno aktivnost. Ugotovili smo, da ima signalno zaporedje gena MFα1 v gojišču YPD najvišjo zunajcelično fitazno aktivnost in signalno zaporedje gena AGA2 najnižjo zunajcelično fitazno aktivnost.[E. Bešić]20182018-10-18 07:45:23Magistrsko delo/naloga104951UDK: 602.3:582.282.23:604.4:577.15VisID: 159555COBISS_ID: 4971896sl