Inaktivacija genskih skupin izbranih biološko aktivnih sekundarnih metabolitov v bakterijah vrste Streptomyces rapamycinicus.Vogrinc, David (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Blažič, Marko (Komentor) streptomiceteStreptomyces rapamycinicusgenetski inženiringinaktivacija genovsekundarni metabolitiSekundarni metabolizem streptomicet je pogosto izredno kompleksen in raznovrsten. Njihovi genomi imajo zapis za biosintezo številnih biološko aktivnih učinkovin, med katerimi številne izkazujejo protibakterijsko delovanje. Napredek na področju identificiranja genskih gruč in njihove anotacije v genom organizmov iz rodu Streptomyces, zahteva razvoj novih metod genske manipulacije. Metode genske manipulacije in ovrednotenje biosinteznih poti predstavljajo enega izmed pristopov pri opredelitvi novih biološko aktivnih učinkovin z zanimivim delovanjem. V sklopu magistrskega dela smo preučevali organizem S. rapamycinicus, znanega producenta rapamicina. Namen našega dela je bil ovrednotiti različne pristope za ciljno inaktivacijo genov znanih genskih skupin (rapamicinska, nigericinska in elaiofilinska) pri izbranem organizmu. Z uporabo molekularno bioloških metod smo načrtovali orodja na osnovi CRISPR-Cas9 metode preurejanja DNA in pripravili plazmide za homologno rekombinacijo. Uspeli smo pridobiti mutante, ki imajo prekinjene odseke v genskih gručah za biosintezo rapamicina, elaiofilina ali nigericina. V nadaljevanju smo pridobili še sev, ki ima prekinjeno tako biosintezo rapamicina kot tudi elaiofilina. Poleg tega smo v S. rapamycinicus pokazali funkcionalnost delovanja poročevalskega sistema na osnovi gena gusA, kot orodja za učinkovitejšo izvedbo genskega inženiringa.[D. Vogrinc]20182018-09-29 07:45:40Magistrsko delo/naloga103961UDK: 602.3:579.873.7:604.4:615.281.9(043.2)VisID: 159179COBISS_ID: 9053305sl