Protein gp6 bakteriofaga GIL01 sproži litični cikel v bakteriji Bacillus thuringiensisPavlin, Anja (Avtor) Butala, Matej (Mentor) temperatni fag GIL01Bacillus thuringiensisodziv SOSLexA represorpreklop iz lizogenega v litični cikelTemperatni bakteriofag GIL01 inficira bakterijo Bacillus thuringiensis. V lizogenem ciklu se bakteriofag podvojuje v bakteriji kot samostojni linearni replikon. V nasprotju z večino ostalih temperatnih fagov, ki uporabijo fagni protein, GIL01 za ohranjanje lizogenega življenskega cikla izkorišča bakterijski trankripcijski faktor LexA. Poškodba DNA sproži litičen cikel faga GIL01. V magistrskem delu smo dokazali, da so litični geni, ki kodirajo proteine kapside in lizo gostiteljske bakterije, prepisani kasneje kot geni, ki uravnavajo replikacijo fagnega genoma in lizogenijo. Natančneje smo preučili uravnavanje litičnega promotorja P3, da bi prepoznali genetsko stikalo za prehod iz lizogenega v litičen cikel faga. Pokažemo, da fagni protein gp7 asistira represorju LexA gostitelja, da v kompleksu preprečita aktivacijo promotorja P3. Dokažemo, da je ključ za prehod faga v litični cikel mali fagni protein gp6. Z metodo na osnovi površinske plazmonske resonance dokažemo, da gp6 interagira s promotorskim področjem P3 tako, da prekriva element -35 promotorja in deluje kot aktivator transkripcije tipa II. Z bioinformatskimi analizami smo pokazali, da je gp6 homolog represorja LexA. Na podlagi modela kompleksa gp6-DNA smo pripravili mutanto gp6 K38A, za katerega smo predvideli, da bo izgubil zmožnost interakcije z zaporedjem promotorja P3. Slednje eksperimentalno potrdimo in dokažemo, da mutanta ne aktivira promotorja P3. Tako kot prvi opišemo molekularni mehanizem časovno uravnanega prepisa litičnih genov faga GIL01 in prvi primer promotorja, katerega aktivnost uravnavata dva proteina iz iste družine, vendar z nasprotujočima si funkcijama.20182018-09-08 07:47:40Magistrsko delo/naloga102833VisID: 155144COBISS_ID: 4890191sl