Razvoj metode za časovno spremljanje razvoja biofilmov z mikroskopomJeršinovič, Nataša (Avtor) Mandić Mulec, Ines (Mentor) Dogša, Iztok (Komentor) mikrobne združbebiofilminastanek biofilmovBacillus subtilisDIC mikroskopijakonfokalna mikroskopijaepsfluorescentni proteiniporazdelitev celičnih gostotBiofilmi so v matriks ujeti večcelični agregati bakterij, ki se pritrjujejo na biološke in nebiološke površine. Bakterijam omogočajo kolonizacijo različnih niš in preživetje neugodnih pogojev. Razvoj biofilma vključuje prehod planktonske oblike življenja v večcelično skupnost. Časovno spremljanje porazdelitve celic pri modelni bakteriji Bacillus subtilis, ki tvori biofilme (pelikle) na stičišču zrak-tekoče gojišče je slabo preučeno. V okviru naloge smo razvili metodo za časovno in prostorsko spremljanje razvoja peliklov modelne bakterije B. subtilis PS-216 s svetlobnim mikroskopom v tekočem gojišču MSgg. Uporabili smo svetlobno-mikroskopski tehniki DIC in konfokalne mikroskopije. S tremi različicami poskusa smo ponazorili delovanje in uporabnost novo razvite metode. Primerjali smo razvoj pelikla pri divjem tipu B. subtilis PS-216 in mutanti Δeps, ki ne proizvaja zunajceličnega polisaharida Eps. Pelikle smo gojili ob dodatku propidijevega jodida, ki obarva DNA in ne vstopa v žive – fiziološko aktivne celice. Ugotovili smo, da so se bakterijske celice divjega tipa med inkubacijo porazdelile bodisi na površino bodisi na dno petrijevke. Barvanje s propidijevim jodidom je pokazalo, da so celice, ki se porazdelijo na dno v slabšem fiziološkem stanju in kmalu po začetku inkubacije odmrejo. Pri gojenju mutante Δeps smo opazili, da celice na površini gojišča začnejo tvoriti pelikel, a se ta ni zmožen obdržati na površini.[N. Jeršinovič]20182018-06-24 07:46:00Magistrsko delo/naloga101676UDK: 579.24+579.26:681.723.26/.27VisID: 151371COBISS_ID: 4921208sl