Anaerobna produkcija bioetanola s transformantami kvasovke Saccharomyces cerevisiae z vključenim genom pfk1.Dragan, Marko (Avtor) Legiša, Matic (Mentor) kvasovkeSaccharomyces cerevisiaetransformirane celicebioetanolgen PFK1Encim fosfofruktokinaza 1 (Pfk1) je osrednji regulatorni encim v glikolizi. Posttranslacijska modifikacija encima Pfk1 omogoča nastanek aktivnih krajših fragmentov Pfk1, ki imajo bistveno višjo aktivnost od izvornih encimov. Humani kratek fragment Pfk-M, velikosti 47 kDa, je bolj nagnjen k aktivaciji, hkrati pa nedovzeten za inhibitorje delovanja encimov Pfk1. Z vnosom gena sfPFKM za sintezo fragmentov Pfk-M v kvasovko S. cerevisiae pride do povišanega metabolnega pretoka preko glikolize, žal pa tudi do porušenega ravnotežja NADH/NADPH, kar pa preprečuje rast celic v gojiščih ob anaerobnih pogojih. Rast je mogoča z vključenim heterolognim genom za malični encim, ki omogoča dodatno produkcijo NADPH. Namen dela je bilo spremljanje rasti kvasovk S. cerevisiae z geni PFK različnega izvora in z genom MAEA za malični encim v fermentativnih gojiščih ob anaerobnih pogojih. S poskusi smo dokazali, da so sevi z vključenimi geni za kratke fragmente in maličnim encimom sposobni rasti na pentoznih sladkorjih, kar pa ne velja za divje tipe kvasovk. To pa je mogoče doseči le s spremembo alosterične regulacije pri encimu Pfk1. V gojiščih smo z upadanjem koncentracije ksilitola opazili kopičenje hlapnega produkta 2-feniletanola. Tako razgradnja pentoz ne pomeni le možnost pridobivanja bioetanola iz lignoceluloznih materialov, temveč tudi drugih industrijsko pomembnih fermentativnih produktov.[M. Dragan]20172017-12-21 07:15:08Magistrsko delo/naloga99012sl