Konstrukcija plazmida RK2-Gm-ColE7a in frekvenca konjugacije pripravljenega plazmida v bakterijo Pseudomonas aeruginosaKužnik, Beti (Avtor) Starčič Erjavec, Marjanca (Mentor) bakterijePseudomonas aeruginosaEscherichia coliplazmidiprotimikrobno delovanjebacteriocinikolicinkolicin E7Bakterija Pseudomonas aeruginosa je oportunističen patogen, ki povzroča širok razpon akutnih in kroničnih okužb. Velik problem pri zdravljenju okužb z bakterijo Pseudomonas aeruginosa je njena odpornost proti antibiotikom, zato se iščejo alternativne možnosti zdravljenja. Cilj magistrske naloge je bila priprava, na konjugaciji temelječega, protimikrobnega dejavnika, ki bi ga lahko uporabili proti bakteriji Pseudomonas aeruginosa. Odločili smo se za plazmid RK2, ki je plazmid širokega spektra in je sposoben prenosa, replikacije in vzdrževanja v večini rodov, po Gramu negativnih bakterij. Plazmidu smo želeli dodati selekcijski označevalec, rezistenco proti gentamicinu in gen z zapisom za sintezo toksina-bakteriocina kolicina E7 ter ga transformirati v bakterijo Escherichia coli. Nadaljnji cilj naloge je bila ocena frekvence konjugacije konstruiranega plazmida iz različnih sevov Escherichia coli v Pseudomonas aeruginosa. Bakterija Escerichia coli je kot producentka kolicina E7 imuna na toksično delovanje tega proteina zaradi gena imunosti na plazmidu pUC19i oziroma integracije gena za imunost v kromosom. Predvidevali smo, da se bo kolicin E7 v recipientski celici, ki nima zapisa za protein imunosti, izrazil in deloval toksično. Uspeli smo pripraviti plazmid RK2-Gm in s preverjanjem konjugacije potrditi, da pravilen vnos selekcijskega označevalca ne vpliva na frekvenco konjugacije. Frekvence konjugacije plazmida RK2-Gm iz donorksih sevov Nissle 1917, HB101 in DH10B v recipientski sev Pseudomonas aeruginosa L-995 so bile okoli 10–6, iz donorskega seva SE15 pa okoli 10–5. Plazmida RK2-Gm-ColE7a tekom magistrske naloge nismo uspeli pripraviti, predstavili pa smo vse metode, ki smo jih pri tem uporabili.[B. Kužnik]20172017-11-12 07:15:06Magistrsko delo/naloga97797sl