Preučevanje reverzibilne vezave bakteriofagov na bakterijeTovornik, Natalija (Avtor) Podgornik, Aleš (Mentor) bakteriofag PC5Campylobacter jejunibakteriofag T4E. colireverzibilna vezavadesorpcijaadsorpcijaadsorbcijska izotermakloroform«spot assay«Preučevanje bakteriofagov (fagov) je v zadnjih letih zopet postalo aktualno, med drugim tudi zaradi povečane odpornosti nekaterih bakterij na antibiotike. Zaradi njihove zmožnosti specifičnega napadanja določene vrste ali seva bakterije, predstavljajo dobro alternativo uporabi antibiotikov. Fag T4 specifično napada bakterijo E. coli in fag PC5 bakterijo C. jejuni. Vsi fagi se v prvi stopnji na gostitelja vežejo reverzibilno, šele nato pride do ireverzibilne vezave in posledično morebitne infekcije celice. Preučevanje reverzibilne vezave obeh bakteriofagov oz. desorpcije in hitrost adsorpcije faga T4, smo zasledovali s spremljanjem titra prostih fagov, ki smo jih nadalje analizirali z metodo štetja plakov »spot assay«. Hitrost adsorpcije smo določili z izračunom adsorpcijske konstante, ki je znašala 3,18 × 10-9 ml/min. Pri fagu PC5 smo določili desorpcijo znatnega števila reverzibilno vezanih fagov, kar je omogočilo analizo s pomočjo Langmuirjeve adsorpcijske izoterme. Vezava faga T4 se je izkazala kot bistveno močnejša in pod pogoji redčenja v hladnem mediju nismo zaznali desorpcije, zato smo reverzibilno vezavo faga T4 preučili še z različnimi mediji, ki bi vplivali na različne tipe interakcij, kot sta dodatek 10 % etanola in dodatek 3 M NaCl, preverili pa smo tudi vpliv ultrazvoka. Z dodajanjem etanola smo dosegli povprečno koncentracijo desorbiranih fagov 1,98 × 104 PFU/ml, kar predstavlja 0,17 % začetnih fagov. Z dodajanjem NaCl povprečno koncentracijo 3,25 × 103 PFU/ml (0,02 % začetnih fagov) in z obdelavo v ultrazvočni kopeli povprečno koncentracijo 3,75 × 103 PFU/ml (0,04 % začetnih fagov). V vseh primerih je bil delež desorbiranih fagov izredno nizek, zaradi česar ne moremo trditi, da gre za reverzibilno desorpcijo.[N. Tovornik]20172017-10-13 07:15:41Magistrsko delo/naloga96734sl