Izražanje dveh PFKL genov humane 6-fosfofrukto-1-kinaze v kvasovki Saccharomyces cerevisiae.Filipič, Irena (Avtor) Legiša, Matic (Mentor) genetikarakaste celiceSaccharomyces cerevisiaeprimarni metabolizemglikoliza6-fosfofrukto-1-kinazanativni in skrajšani fragmentEncim 6-fosfofrukto-1-kinaza je pomemben regulatorni encim glikolize. Obstajajo trije tipi encima in jetrni tip tega encima, Pfk-L, je bil v rakastih celicah zaznan v višjih koncentracijah. Značilnost encima Pfk-L je tudi postrtanslacijska modifikacija, pri kateri nastane tudi krajša, bolj aktivna oblika encima. V našem delu smo hoteli primerjati aktivnost nativne in skrajšane oblike encima v različnih pogojih. Tako smo gena za obe obliki encima vnesli v plazmid in nato plazmid vnesli v sev kvasovke, ki nima lastne 6-fosfofrukto-1-kinaze. Z gojenjem transformiranih sevov v osnovnem gojišču brez uracila smo potrdili prisotnost samega plazmida v celicah kvasovk. Nato smo seve gojili še na trdnih in tekočih gojiščih, ki so kot vir ogljika vsebovali glukozo, fruktozo ali maltozo. Transformirana seva sta dobr rasla le na trdnem gojišču z maltozo, v tekočem gojišču pa sta rasla le ob dodatku etanola. Vse to je nakazovalo na dejstvo, da vnesena gena ne omogočata nastanka aktivne oblike encima. Pri merjenju encimske aktivnosti pa smo to še potrdili, saj je bila njuna aktivnost komaj zaznavna. Glede na to, da tudi nativna oblika ni rasla na enostavnih sladkorjih, lahko sklepamo, da že izbrani gen verjetno ni bil optimalen za uporabo v takšnem poskusu. Uporabljena oblika gena je namreč nastala z alternativnim izrezovanjem in ni kanonična oblika gena.[I. Filipič]20172017-10-02 15:55:44Magistrsko delo/naloga96460sl