URAVNAVANJE PREPISOVANJA IN LOKALIZACIJE TRANSKRIPCIJSKEGA FAKTORJA PTIFric, Katja (Avtor) Gruden, Kristina (Mentor) Dermastia, Marina (Recenzent) Transkripcijski faktor/Pti5/ PR1b/krompir (Solanum tuberosum L.)/Nicotiana benthamiana/&#946- glukuronidazni test/konfokalni mikroskopPo okužbi krompirja s krompirjevim virusom PVY se transkripcijski faktor Pti5 premakne v jedro. Pti5 iz družine ERF (angl. ethylene response factors) ima glavno vlogo pri aktivaciji in utišanju tarčnih genov, ki so pomembni v odgovoru na stres. V magistrskem delu smo raziskovali mehanizem, ki sproži lokalizacijo Pti5 v jedro. Modelne rastline tobaka Nicotiana benthamiana smo prehodno transformirali s konstruktom, ki vsebuje gen Pti5 v fuziji z rumenim fluorescenčnim proteinom (YFP) pod konstitutivnim promotorjem 35S in jih obdelali s kinaznim inhibitorjem. Sledili smo izražanju fluorescenčnega proteina s pomočjo konfokalnega mikroskopa. Iz dobljenih rezultatov sklepamo, da sama translokacija Pti5 ni zaradi fosforilacije. Prav tako nas je zanimalo, če je za translokacijo dovolj le en virusni protein. Ugotovili smo, da lahko že P19, virusni supresor utišanja RNA iz tombusvirusov vpliva na translokacijo Pti5 v jedro. Vedeli smo, da je Pti5 na stičišču hormonskih poti salicilne kisline (SA), etilena (ET) in jasmonske kisline (JA). Z uporabo β-glukuronidaznega testa smo ugotavljali aktivnost promotorja Pti5 v primerjavi s promotorjem PR1b, ki je označevalec signalne poti SA, po obdelavi z zgoraj naštetimi hormoni oz. njihovimi inhibitorji. Sklepamo, da tako analog SA INA, kot prekurzor ET ACC povečata indukcijo promotorja Pti5 in PR1b v listih tobala N. benthamiana. Prav tako iz rezultatov sklepamo, da PR1b uravnava SA neodvisno od ET. Pti5 najverjetneje uravnava SA v etilenski signalni poti. S prenosom western smo želeli ugotoviti, če se pri rastlinah okuženih s PVY, poveča kopičenje Pti5 v jedru. Slednje smo potrdili le z rezultati s konfokalnim mikroskopom.20172017-09-21 07:58:27Magistrsko delo/naloga95735sl