Kemobiosintezni proces za produkcijo analogov FK506 z bakterijami rodu StreptomycesRamšak, Barbara (Avtor) Petković, Hrvoje (Mentor) Paš, Maja (Komentor) streptomiceteStreptomyces tsukubaensispoliketidiFK506takrolimusbiosinteza poliketidovkemobiosintezaFK506 (takrolimus) je makrolakton poliketidnega izvora z imunosupresivno aktivnostjo, ki ga proizvajajo nekatere streptomicetne vrste. Uporablja se kot imunosupresivno zdravilo za preprečevanje zavrnitve organov po presaditvi in zdravljenje vnetnih kožnih bolezni. Pri uporabi FK506 so pogosti neželeni učinki kot so nefrotoksičnost, nevrotoksičnost in arterijska hipertenzija. Z uporabo Streptomyces tsukubaensis NRRL 18488, ki je industrijski producent FK506, smo razvili robusten bioproces za produkcijo FK506 na nivoju stresalnika. Vzpostavljen bioproces smo uporabili za optimizacijo kemobiosinteznega postopka, kjer smo v procesno brozgo S. tsukubaensis s prekinjenim genom allR (homologom krotonil-CoA-reduktaze/karboksilaze) dodajali prekurzor propargilmalonil-SNAC in na ta način pridobili nov analog FK506. Sev S. tsukubaensis s prekinjenim genom allR ne more sintetizirati FK506, niti FK520 in propil-FK506, ki nastajata kot stranska produkta med bioprocesom. Prisotnost novega analoga FK506, propargil-FK506 smo potrdili z metodo HPLC in MS. Produkcija propargil-FK506 je bila nižja v primerjavi s produkcijo FK506 pri izhodnem naravnem sevu S. tsukubaensis in pri sevu ∆allR po dohranjevanju z naravno podaljševalno enoto alilmalonil-SNAC. Nadalje smo zato optimizirali kemobiosintezni proces z dodajanjem propargilmalonil-SNAC v različnih koncentracijah. Ugotovili smo, da imajo višje koncentracije nenaravne podaljševalne enote propargilmalonil-SNAC inhibitorni učinek na produkcijo FK506 pri sevu S. tsukubaensis NRRL 18488. Kemobiosintezni bioproces je deloval najbolj optimalno pri koncentraciji prekurzorja propargilmalonil-SNAC v končni koncentraciji 0,5 g/L in temperaturi 24 °C.20172017-07-22 07:15:24Magistrsko delo/naloga94263sl