Izražanje fragmentov protiteles proti prionom v mezenhimskih matičnih celicah in njihova karakterizacijaNovak, Neža (Avtor) Rajčević, Uroš (Mentor) prionimezenhimske matične celiceprotiteloelektroporacijaTerapija prionskih bolezni še ni poznana, se pa v zadnjem času raziskuje veliko novih principov zdravljenja. Eden od teh je zdravljenje s protitelesi proti prionom, ki bi lahko preprečila širjenje PrPSc. Mezenhimske matične celice (MMC) so potencialni vektor za dostavo teh protiteles v možgane zaradi lastnosti samoobnavljanja, diferenciacije, imunomodulacije, sposobnosti prečkanja krvno-možganske pregrade ter pato-tropizma. V naši raziskavi smo skušali vstaviti zapis za fragment scFv protitelesa V5B2 v mišje MMC s pomočjo elektroporacije. V prvem delu smo optimizirali pogoje elektroporacije, in sicer smo uporabili 8 kvadratnih pulzov, dolgih 1 ms, z močjo električnega polja 1,0 kV/cm in frekvenco 1 Hz. Celice v koncentraciji 3 x 106 celic/ml smo porirali v visoko prevodnem pufru. Koncentracija plazmida z vstavljenim GFP je bila 30 µg/ml. Elektroporacijo smo ponovili s plazmidi z vključki za znotraj- in zunajcelično izražanje scFv V5B2. Celice smo okarakterizirali s pretočno citometrijo in ugotovili, da ima elektroporacija le majhen vpliv na fenotip MMC. Prisotnost scFv V5B2 v celicah in gojišču smo skušali dokazati z imunocitokemijsko analizo in testom ELISA, a nismo bili uspešni. Glede na naše rezultate se scFv V5B2 ne izraža v mišjih MMC. Za uspešno izražanje bi bila potrebna nadaljnja optimizacija metode transfekcije, morebitna zamenjava vektorja konstruktov ter optimizacija analitičnih metod za detekcijo izražanja.[N. Novak]20172017-06-11 07:15:22Magistrsko delo/naloga92549sl