Priprava gensko spremenjene kvasovke Saccharomyces cerevisiae kot modelnega organizma za študij metabolizma rakastih celic.Ambrožič, Tadeja (Avtor) Legiša, Matic (Mentor) Saccharomyces cerevisiaerak6-fosfofrukto-1-kinazamalični encimHumani modificirani encim Pfk-M, velikosti 47 kDa, je ključni dejavnik povečane aktivnosti glikolize v rakastih celicah. Encim Pfk-M, ki ga kodira konstruiran sfPFKM gen, je bolj dovzeten za aktivacijo z efektorji, kot nativni protein in odporen na povratno inhibicijo. Visoko aktiven encim Pfk-M dvigne nivo citosolnega NADH v rakastih celicah in transformantah S. cerevisae, ki imajo vstavljen humani sfPFKM gen. Pri transformantah S. cerevisiae z vstavljenim sfPFKM genom so opazili porušeno razmerje NADH/NADPH, ki preprečuje rast na maltozi. Namen dela je bil vnos MAEA gena, ki kodira citosolni NADP+ specifični malični encim v transformanto S. cerevisiae z sfPFKM. Spremenjeni bakterijski MAEA gen kodira protein, katerega vloga je popraviti ustrezno razmerje med NADH/NADPH nukleotidoma izboljšanje razmerja med nukleotidoma v celicah in s tem omogočiti rast sevu S. cerevisiae sfPFKM/MAEA na maltozi. Po uspešnem vnosu MAEA gena v S. cerevisiae/sfPFKM smo zaznali visoko aktivnost NADP+ specifičnega maličnega encima. Ugotovili smo, da imajo sevi najboljšo specifično hitrost rasti v gojišču z 0,05 % maltozo z dodanima aminokislinama, glutamatom in glutaminsko kislino, ter malatom. Spremljali smo specifično hitrost rasti, porabo maltoze in nastajanje etanola, glicerola ter acetata. Predvidevamo, da je vnos gena MAEA v S. cerevisiae omogočil rast seva S. cerevisiae/sfPFKM/ MAEA na maltozi zaradi popravljenega razmerja NADH/NADPH v citosolu.[T. Ambrožič]20172017-06-05 07:59:11Magistrsko delo/naloga92502sl